[发明专利]心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法，其特征在于，所述心脑血管用药相关基因多态性位点包括ADD1-RS4961、CYP2C9*3-RS1057910、CACNA1C-RS1051375、CYP2D6*10-RS1065852、SLCO1B1-RS4149056、CYP3A5-RS776746、ADRB1-RS1801253中的至少一种；

所述检测方法包括以下步骤：

1)PCR扩增引物的制备：PCR扩增引物为根据所选择的待检测的个体化用药相关基因设计的特异性针对每种基因的扩增引物，所述扩增引物可扩增包括突变位点在内的一段DNA序列，所述扩增引物在3'端具有与其所针对的基因序列完全匹配的17-25个碱基，在5'端具有标签序列，以区分扩增引物与延伸引物；

2)质谱延伸引物的制备：所述质谱延伸引物的长度为15-28个碱基并且其3'端位于个体化用药相关基因突变位点在延伸方向上的上一个碱基，延伸引物在发生延伸反应时，只延伸一个碱基，延伸的碱基即为个体化用药相关基因突变位点；

3)检测模板的制备：提取待测样本DNA；

4)以步骤3)中提取的DNA为模板，使用步骤1)中所述PCR扩增引物进行PCR扩增，获得靶序列扩增产物；

5)通过SAP酶处理，除去步骤4)获得的扩增产物中含有的未反应的dNTP；

6)以步骤5)中获得的扩增产物为模板，使用步骤2)中的所述质谱延伸引物通过延伸反应，在延伸引物的3'端连接一个碱基，从而得到延伸产物；

7)纯化步骤6)中获得的延伸产物；

8)将纯化后的产物在质谱仪上进行质谱检测，所得到的质谱峰图通过分析软件进行分析，得到分型结果。

2.根据权利要求1所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，扩增引物在5'端具有相同的标签序列。

3.根据权利要求2所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法，其特征在于，所述的标签序列为acgttggatg。

4.根据权利要求1所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中的扩增引物包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:14序列中的至少一对。

5.根据权利要求1所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中的延伸引物包括SEQ ID NO:15～SEQ ID NO:21序列中的至少一对。

6.一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR扩增引物、质谱延伸引物；

所述PCR扩增引物为根据所选择的待检测的个体化用药相关基因设计的特异性针对每种基因的扩增引物，所述扩增引物可扩增包括突变位点在内的一段DNA序列，所述扩增引物在3'端具有与其所针对的基因序列完全匹配的17-25个碱基，在5'端具有标签序列，以区分扩增引物与延伸引物；

所述质谱延伸引物的长度为15-28个碱基并且其3'端位于个体化用药相关基因突变位点的在延伸方向上的上一个碱基，延伸引物在发生延伸反应时，只延伸一个碱基，延伸的碱基即为个体化用药相关基因突变位点。

7.根据权利要求6所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物在5'端具有相同的标签序列。

8.根据权利要求7所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述的标签序列为acgttggatg。

9.根据权利要求6-8任一项所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:14序列中的至少一对。

10.根据权利要求6-8任一项所述的一种心脑血管用药相关基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述延伸引物包括SEQ ID NO:15～SEQ ID NO:21序列中的至少一对。