[发明专利]一种中和人感染H7N9甲型流感病毒的抗体及其用途

说明书

本发明涉及结合并中和人感染H7N9甲型流感病毒血凝素蛋白的人源化抗体及与其抗原结合的抗体片段，包括抗体重链和轻链可变区的核苷酸和氨基酸序列。本发明还涉及完整抗体在CHO细胞等体系中高效表达的方法。此外本发明还涉及所述抗体、相关血凝素蛋白抗原结合片段和表位在人感染H7N9甲型流感病毒感染的诊断、治疗和预防中的用途。

本申请是申请号为201410081962.4，申请日为2014年3月7日，发明名称为“一种中和人感染H7N9甲型流感病毒的抗体及其用途”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及新的抗A型H7N9流感的血凝素HA蛋白的抗体系列及其人源化抗体，该类抗体可在较小的剂量下中和100TCID₅₀的H7N9病毒到半数感染MDCK细胞，并且针对10LD50剂量下保护小鼠，达到90％的死亡保护率，因而该抗体可用于针对H7N9病毒所引发疾病的治疗和预防。本发明还涉及抗体结合的H7N9血凝素蛋白的结合表位及其抗体所结合的氨基酸。本发明还涉及采用基因重组技术在CHO细胞中生产该抗体的方法。

背景技术

流感病毒通过血凝素(HA)的类型定义为A和B两种类型，A型可细分为16种亚型，其中组I有H1，H2，H5，H6，H8，H9，H11，H12，H13和H16亚型存在，组II由H3，H4，H7，H10，H14和H15亚型组成。B型和A型中的H1，H2和H3在人类中引发较广泛的流感疾病，H5，H7和H9亚型在人类中引起散发性严重感染并可能引起新的大流行病。2013年的2月到6月，在中国爆发了高致病性和高死亡率的人感染甲型H7N9流感病毒，共132人感染，其中43人死亡【Rongbao G等人.N Engl J Med.2013,368:1888-1897】。该病毒由在人类中散发的H7和N9亚型的病毒重配而成，人体中没有建立相应的免疫反应记忆，因此该病毒感染可引发剧烈的呼吸道窘迫综合征，导致病人死亡【Kageyama T等人，Euro SUrvell.2013.18:20453】。人季节性流感疫苗由A-H1N1，A-H3N2和B型3种亚型组成，人体对该类疫苗建立的免疫应答对H7N9病毒没有保护作用。因此H7N9病人感染后，急需外源的抗病毒药物来抑制病毒在体内的扩增。尽管，目前还没有人之间H7N9感染的传播，但已有多个实验表明，在流感敏感性动物如雪貂、猪之间可以发生非接触性的空气传播【Herfst S,等人，Science.2012；336:1534-41；H.Zhu等人，Science.2013.341(6142):183-186】。秋冬季为流感的高发季节，我们需要有效的药物来控制和治疗可能发生的新的H7N9流感病例的出现。

当前，对H7N9病毒抑制药物为达菲(Oseltamivir)或其类似物(Zanamivir)，该小分子药物为流感病毒NA蛋白的酶活性抑制剂，它们的效果是避免或减少病毒的扩增，从而达到降低病毒滴度的治疗效果。该药物在临床上有一定的效果，但其病毒清除的速率还是比较慢，并且已有出现达菲耐受株的报道，因此需要有更理想的药物来快速降低病毒在体内的复制【Yunwen Hu等人，Lancet.2013.381:2273-79】。