[发明专利]一种溶酶体三磷酸腺苷识别碳点的制备方法及应用

权利要求书

1.一种溶酶体三磷酸腺苷识别碳点的制备方法，其特征在于步骤如下：

（1）将柠檬酸、三亚乙基四胺与罗丹明混合置于无水乙醇中，配制成前体混合物，放置于微波管中；

（2）将步骤（1）中的微波反应管放置于微波反应器中，将前体混合物加热到100-135℃，反应0.1-1 h，反应后的产品自然冷却至室温；

（3）将步骤（2）冷却后的产品放入1KDa透析膜中，在乙醇溶液的环境中透析48 h，得到纯化后的碳点溶液；

（4）利用旋转蒸发仪将步骤（3）得到的碳点溶液中的乙醇去除，得到碳点油状物质；

（5）将步骤（4）中的碳点油状物质溶于蒸馏水中，真空冷冻干燥，得到碳点固体。

2.根据权利要求1所述的溶酶体三磷酸腺苷识别碳点的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中罗丹明为罗丹明6G，罗丹明B，罗丹明123，罗丹明101，罗丹明110。

3.根据权利要求1所述的溶酶体三磷酸腺苷识别碳点的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中柠檬酸、三亚乙基四胺与罗丹明化合物的摩尔比为（100-2）：（100-2）：1。

4.权利要求1-3任一项所述的制备方法制备的碳点在识别三磷酸腺苷中的应用，其特征在于：所述碳点在体外酸性环境中对三磷酸腺苷进行识别。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于步骤如下：

（1）将碳点的乙醇溶液稀释在Tris-HCl缓冲中，使终浓度为50 μg/ mL，得到混合液A；

（2）将不同浓度的三磷酸腺苷溶液加入到混合液A中，反应一段时间，得到一系列混合液；

（3）将步骤（2）中的混合液放入荧光比色皿中，利用荧光分光光度计，测量荧光强度。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述步骤（1）中Tris-HCl缓冲溶液的浓度为20 mM，pH范围为4.0-6.5。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述步骤（2）中三磷酸腺苷溶液的浓度为0-5 mM，反应时间为10-60 min。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述步骤（3）中所用荧光分光光度计的激发波长为420-530 nm。

9.权利要求1-3任一项所述的制备方法制备的碳点在识别三磷酸腺苷中的应用，其特征在于，所述碳点在细胞溶酶体中对三磷酸腺苷进行识别，具体步骤如下：

（1）将细胞接种于共聚焦皿中，在37 ℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中培养12-24 h，得到培养液A；

（2）将碳点加入到步骤（1）得到的培养液A中，在37 ℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中培养0.5-12 h，得到培养液B；

（3）将溶酶体染色剂LysoTracker^TM Deep Red加入到步骤（2）得到的培养液B中，孵育10min，得到培养液C；

（4）用磷酸盐缓冲液冲洗细胞；用激光共聚焦显微镜成像系统进行拍摄成像。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述步骤（1）中细胞为HeLa细胞、HepG-2细胞、RAW264.7细胞、HL-7702细胞和3T3细胞中的任意一种；所述步骤（2）中碳点加入后的浓度为10-100 μg/mL。