[发明专利]inhA来源的抗结核CTL表位肽及其应用

说明书

本发明公开了一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。本发明还提供了含所述多肽的药物组合物、食品或保健品及多肽的对应用途。本发明筛选获得表位肽，通过体外ELISPOT和细胞杀伤实验等对表位肽进行鉴定，为后续研制基于耐药突变抗原的结核疫苗以及诊断制剂提供了理论基础，并为设计基于混合T细胞表位的结核多表位疫苗提供更多的选择。

技术领域

本发明具体涉及抗结核CTL表位肽及其应用。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种严重危害人类健康的慢性传染性疾病。目前耐药型结核分枝杆菌(包括耐多药结核(MDR-TB)和广泛耐药结核(XDR-TB))的不断出现和传播使得结核病的控制面临很大的挑战。

对于结核病的治疗，目前WHO推荐使用的针对药物敏感性结核感染的疗法需要一线药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、(EMB)和(PZA)的联用。此疗法行之有效，但是治疗时间较长。对于MDR-TB而言WHO建议至少连续20个月的二线药物治疗。总之，多药物联合化疗治疗时间长，副作用明显，易复发的诸多问题还没有被解决，所以寻找新的耐药结合病的治疗策略便称为必然的趋势。

在结核疫苗方面，卡介苗BCG是预防结核病方面已有百年历史，且是目前唯一临床可用疫苗，但是仅在发生于儿童的结核病显示出一定的预防效果，对成年人的保护效果差异较大。随着基因工程测序技术的发展，对MTB全基因组测序以及新发现耐药突变结核菌株的测序更有利于开发相关的疫苗。

造成结核菌耐药的原因有固有耐药和获得性耐药两方面。前者和菌体富含分枝菌酸的细胞壁结构有关，这种结构使得MTB具有相对于抗生素和一些化疗药物较低的渗透性，从而引起了菌体耐药表型的产生。而获得性耐药主要是在药物存在的条件下由MTB外排泵蛋白的高表达和一些耐药aa突变所引起。本研究主要关注的是引起结核分枝杆菌耐药的MTB的药物靶点和关键酶中的aa发生突变。inhA(Rv1484)是MTB当中另外一个耐药相关抗原蛋白，其主要功能是催化与菌体细胞壁合成密切相关的分枝菌酸的合成，有报道显示S94A的这一发生于inhA的突变型能够增强菌株对异烟肼的抗性，且此种突变被证明是对菌体自身建立有利于inhA功能效应的pH范围有所助益。另外，能显著提高菌株对异烟肼抗性的还有突变型I21V，结果显示INH对发生此aa突变的菌株的最小抑菌浓度增加了16倍。

结核感染过程中，宿主体内的适应性免疫过程中CD8⁺T淋巴细胞免疫反应对病原菌的控制有着重要作用。而CD8⁺T淋巴细胞的激活有赖于抗原片段在抗原提呈细胞APC中被酶解为表位肽，并与MHC-I类分子形成肽/MHC分子复合物递呈到APC表面供CD8⁺T细胞所识别。活化的CD8⁺T淋巴细胞能够特异性的识别感染的细胞并将其杀伤。鉴定出MHC-I限制性结核耐药相关突变抗原来源的CTL表位肽能够帮助我们更好的理解结核的感染免疫机制和开发新型的结核疫苗。

发明内容

第一方面，本发明提供一种结核耐药突变抗原inhA(Rv1484)来源的抗结核CTL表位肽，其氨基酸序列为SXAFHIARV，X为I或V，如为结核耐药突变抗原inhA(Rv1484)来源的限制性表位肽Rv1484-p20^I21V(所述候选肽的氨基酸序列为SVAFHIARV)或Rv1484-p20^WT(氨基酸序列为SIAFHIARV)

所述表位肽可通过固相合成制得，如采用标准Fmoc方案制备。

第二方面，本发明提供了含所述表位肽的食品、保健品或药物组合物，药物组合物可包括多肽及其药学上可接受的载体或赋形剂，其形式可为疫苗。

第三方面，本发明提供了所述表位肽在制备所述食品、保健品或药物组合物中的用途，或用于结核病诊断分子标志物。

第四方面，本发明提供编码所述表位肽的DNA分子，或由含有编码所述表位肽的DNA分子编码的重组蛋白。