[发明专利]帕利亚姆血清群病毒群特异性与血清型特异性RT-PCR检测引物及试剂盒

权利要求书

1.帕利亚姆血清群病毒群特异性与血清型特异性RT-PCR检测引物，其特征在于，包括4对引物，分别为PALV-S7-F和PALV-S7-R、CHUV-S2-F和CHUV-S2-R、BCV- S2-F和BCV-S2-R、DAV- S2-F和DAV-S2-R；

PALV-S7-F：5’-gaaacay（t/c）aaty（t/c）cagcaaggaac-3’，（SEQ ID NO.1）；

PALV-S7-R：5’-tcatacataaggtcgcacgcaa-3’，（SEQ ID NO.2）；

CHUV-S2-F：5’-ggattcacgcy（t/c）attactcgga-3’，（SEQ ID NO.3）；

CHUV-S2-R：5’-atggatttcttgttgggattat-3’，（SEQ ID NO.4）；

BCV- S2-F：5’-grgctr（g/a）tcatagattcggaagc-3’，（SEQ ID NO.5）；

BCV-S2-R：5’-tacaaacy（t/c）tttacy（t/c）agagccat-3’，（SEQ ID NO.6）；

DAV-S2-F：5’-atttttcaacgaagagacgtg-3’，（SEQ ID NO.7）；

DAV-S2-R：5’-ataggaacacctttaccy（t/c）agg-3’，（SEQ ID NO.8）。

2.含有权利要求1所述帕利亚姆血清群病毒群特异性与血清型特异性RT-PCR检测引物的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括空白对照模板、阳性对照模板和PCR扩增试剂；

所述的空白对照模板为RNase Free Water；

所述的阳性对照模板有三个，分别为CHUV、BCV、DAV灭活病毒。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，CHUV、BCV、DAV病毒灭活前的滴度分别为4.5×10³PFU/mL、3.5×10³PFU/mL、6.2×10³PFU/mL，使用β-丙内酯灭活。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂包括PrimeScript 1Step Enzyme Mix和2×1 Step Buffer。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，分别使用PALV-S7-F+PALV-S7-R引物对、CHUV-S2-F+CHUV-S2-R引物对、BCV-S2-F+BCV-S2-R引物对、DAV-S2-F+DAV-S2-R引物对进行PCR扩增的体系均为25μL，具体如下表所示：

总计25μL。

7.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒涉及的四对引物的扩增程序相同：50℃ 反转录30 min；94℃ 灭活逆转录酶2 min；94℃ 预变性30 s、56℃ 退火30 s、72℃延伸 75s，30个循环；72℃终延伸10 min，4℃ 保存。