[发明专利]一种松花粉掺伪的多重PCR鉴定方法及其专用引物组与试剂盒有效
| 申请号： | 201910980690.4 | 申请日： | 2019-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN110564890B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 仲米存;衣洁菡;尹雷;王桐;王洪涛;郝娜;曲涛 | 申请（专利权）人： | 烟台新时代健康产业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 烟台上禾知识产权代理事务所(普通合伙) 37234 | 代理人： | 曲姮 |
| 地址： | 264006 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 松花粉 多重 pcr 鉴定 方法 及其 专用 引物 试剂盒 | ||
1.一种松花粉掺伪的多重PCR鉴定的专用引物组，其特征在于，包括针对松花粉、蒲黄、玉米粉的叶绿体trnL-F基因设计的三条特异性正向引物和一条通用的反向引物；
其中，针对松花粉的叶绿体trnL-F基因的特异性正向引物，其核苷酸序列如SEQ IDNO. 1所示；针对蒲黄的叶绿体trnL-F基因的特异性正向引物，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；针对玉米粉的叶绿体trnL-F基因的特异性正向引物，其核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；所述通用的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
松花粉的叶绿体trnL-F基因的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示；蒲黄的叶绿体trnL-F基因的核苷酸序列如SEQ ID No：6所示；玉米粉的叶绿体trnL-F基因的核苷酸序列如SEQID No：7所示。
2.一种松花粉掺伪的多重PCR鉴定的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的专用引物组。
3.一种松花粉掺伪的多重PCR鉴定方法，使用如权利要求1所述的专用引物组或如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，对待测松花粉样品进行多重PCR扩增，然后对多重PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如出现747bp的特异性条带，则判定为含有蒲黄掺入；如出现281bp的特异性条带，则判定为含有玉米粉掺入；如出现459bp的特异性条带，则判定为含有松花粉。
4.根据权利要求3所述的松花粉掺伪的多重PCR鉴定方法，其特征在于，多重PCR反应条件为：先94℃预变性4min；然后94℃ 30s，52℃ 30s，72℃ 60s，共35个循环；最后72℃延伸5min，4℃保温。
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