[发明专利]用于检测幽门螺杆菌耐药突变位点的引物和探针组及应用

说明书

本发明涉及消化道相关疾病诊断技术领域，具体涉及用于检测幽门螺杆菌耐药突变的引物和探针组及应用。该引物和探针组，包括：用于检测幽门螺杆菌PBP1A基因的阿莫西林耐药突变位点的第一PCR检测引物对，所述第一PCR检测引物对由第一上游引物和第一下游引物组成，所述第一上游引物为用于检测PBP1A基因的Ser414Arg突变的上游引物、用于检测PBP1A基因的Thr556Ser突变的上游引物、用于检测PBP1A基因的Asn562Tyr突变的上游引物中任一种或任意两种的组合或三种的组合；第一探针；至少一种阻断序列，包括对应于所述第一上游引物的阻断序列。

技术领域

本发明涉及消化道相关疾病诊断技术领域，具体涉及用于检测幽门螺杆菌耐药突变位点的引物和探针组及应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是世界上流行范围最广的病原体，全世界大约有50％的人感染了幽门螺杆菌，而在我国有40％-70％的人群感染幽门螺杆菌。幽门螺杆菌主要引起胃肠道消化系统相关疾病，如慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等等。目前对幽门螺杆菌的治疗主要采用含有抗生素的三联或四联疗法进行，而随着抗生素的大量使用，幽门螺杆菌已经出现了抗生素的耐药现象。因此，幽门螺杆菌的耐药检测对临床用药的指导具有重要意义。

目前临床上检测幽门螺杆菌是否耐药主要为药敏试验，即通过培养Hp与不同抗生素进行体外反应从而确定其最低抑菌浓度来判断是否耐药。

药敏试验的大致步骤为：

从病人的感染部位采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下培养；同时将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面(或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液)，培养一定时间后观察结果。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。然后根据试验结果有针对性地选用抗生素。

幽门螺杆菌药敏试验首先需要对幽门螺杆菌进行培养。幽门螺旋杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性杆菌，因此幽门螺杆菌的培养难度大，操作复杂，且耗时较长(药敏试验整个过程通常需要1-2周)。所以幽门螺杆菌的药敏试验成本高，灵敏度低。

发明内容

本发明提供一种检测幽门螺杆菌耐药突变位点的引物和探针组及应用，检测幽门螺杆菌耐药突变位点的灵敏度高、耗时短。

第一方面，本发明实施例提供了一种用于检测幽门螺杆菌耐药突变位点的成套DNA分子，包括：

用于检测幽门螺杆菌PBP1A基因的阿莫西林耐药突变位点的第一PCR检测引物对，所述第一PCR检测引物对由第一上游引物和第一下游引物组成，所述第一上游引物为用于检测PBP1A基因的Ser414Arg突变的上游引物、用于检测PBP1A基因的Thr556Ser突变的上游引物、用于检测PBP1A基因的Asn562Tyr突变的上游引物中任一种或任意两种的组合或三种的组合；

第一探针；

至少一种阻断序列，包括对应于所述第一上游引物的阻断序列。

在一个实施例中，所述用于检测PBP1A基因的Ser414Arg突变的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述用于检测PBP1A基因的Thr556Ser突变的上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；

所述用于检测PBP1A基因的Asn562Tyr突变的上游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；

对应于所述用于检测PBP1A基因的Ser414Arg突变的上游引物的阻断序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；