[发明专利]一种以HCH285发酵所得的固体产物中提取分离bostrycin的方法

说明书

本发明提供了一种以HCH285发酵所得的固体产物中提取分离bostrycin的方法，包括：(1)固体产物原料的获得：将HCH285固体发酵方法所得的发酵产物粉碎过筛即得固体产物原料；或将HCH285液体发酵方法所得的发酵液经喷雾干燥后收集得到的固体粉末粉碎过筛即得固体产物原料；(2)提取分离：将所得固体产物原料加入70％～95％的甲醇超声提取，以固体产物原料为基础按体积计算，料液比为1：250～1：400g/mL；所述发酵液制得的固体产物原料使用70％～95％的甲醇超声提取时将pH调至1.5～2.5。该方法能够成功提取分离醌类化合物bostrycin，且bostrycin的得率高。

技术领域

本发明涉及bostrycin(卷线孢菌素)制备方法领域，特别涉及一种以HCH285发酵所得的固体产物中提取分离bostrycin的方法。

背景技术

醌类化合物bostrycin是一种天然色素产物，最先在1968年由Noda T发现(Nodaet al 19681970)。据文献报道，bostrycin能够抑制肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤细胞的生长(Chen et al 2011，Chen et al 2012，陈冬妮2013)，且对卡介苗、结核分枝杆菌均有抑制作用，尤其对多种药物有耐性的结核分枝杆菌有较好活性(黄宇虹2011)。虽然bostrycin在抗菌、抗肿瘤等多方面表现出较大优势，但工业合成困难，产量较少，对其深入研究存在局限。而微生物资源丰富，培养成本低廉。利用微生物发酵生产药物具有生产周期短、产量高等优点。所以，从药用植物分离获得产bostrycin的微生物，经发酵后从产物中提取bostrycin，将可以大大提高其产量，具有极大的研究意义。

国内外已有从植物中分离得到产bostrycin内生菌的报道(Xu et al 2010，Xiaet al 2011，Charudattan et al 1982)，但多集中于液体发酵研究，所得产物通常经乙酸乙酯多次萃取后浓缩，再用硅胶柱进行色谱分离，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱，收集一定浓度乙酸乙酯/石油醚的洗脱液，再以聚酰胺柱层析分离，重结晶得红色颗粒状晶体化合物bostrycin。此方法主要适用于从发酵液中提取分离bostrycin。但大量发酵液不易长期存放，且bostrycin易受温度、光照等影响从而发生性质的改变。

本发明人所在的课题组之前筛选到了一株产bostrycin的蕲艾内生菌HCH285，专利号为“201710183008.X”，所述的菌株已于2017年2月23日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：球黑孢菌(Nigrospora sphaerica)HCH285，保藏编号为CCTCC NO：M2017061，地址：中国武汉武汉大学。如何开发一种以固体发酵方法所得发酵产物和发酵液经喷雾干燥后所得固体产物为原料，提取分离醌类化合物bostrycin的方法，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种提取分离醌类化合物bostrycin的方法，该方法能够成功提取分离醌类化合物bostrycin，且bostrycin的得率高。

本发明这样实现：

本发明提供一种以HCH285发酵所得的固体产物中提取分离bostrycin的方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1、固体产物原料的获得：将HCH285固体发酵方法所得的发酵产物粉碎过筛即得固体产物原料；或将HCH285液体发酵方法所得的发酵液经喷雾干燥后收集得到的固体粉末粉碎过筛即得固体产物原料；

步骤2、提取分离：将步骤1所得的固体产物原料加入70％～95％的甲醇超声提取，以固体产物原料为基础按体积计算，料液比为1：250～1：400(g/mL)；所述发酵液制得的固体产物原料使用70％～95％的甲醇超声提取时将pH调至1.5～2.5。

本发明具有以下有益效果：