[发明专利]一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片及其制作方法与应用

权利要求书

1.一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片，其特征在于，包括固相载体和阵列式分布于固相载体上的差异蛋白抗体，所述差异蛋白抗体包括：显著下调蛋白Cystatin-B与Leucine-richalpha-2-glycoprotein、显著上调蛋白Calmodulin与Talin-1、Gla、IFN-γ、RAB7A、TSP1、GAS6、PINP及NMID。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片，其特征在于，所述蛋白芯片还包括阳性对照和阴性对照。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片，其特征在于，所述固相载体为玻璃载片、滴定板或滤膜。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片，其特征在于，所述蛋白芯片是分别将差异蛋白抗体、阳性对照和阴性对照利用点制基因微阵列商品化点样仪或喷膜法点制到固相载体上。

5.根据权利要求4所述的一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片，其特征在于，所述差异蛋白抗体、阳性对照和阴性对照点样3-5个重复。

6.一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片的制作方法，其特征在于，所述制作方法包括以下步骤：

1）固相载体及其处理：使用琼脂糖膜处理固相载体，所述固相载体上设置有阴性控制孔与阳性控制孔；

2）蛋白质预处理：将差异蛋白抗体溶解；

3）点制微阵列：将步骤2）得到的差异蛋白抗体、阳性对照和阴性对照利用点制基因微阵列商品化点样仪或喷膜法点制到固相载体上，每个差异蛋白抗体、阳性对照和阴性对照点样3-5个重复；

4）固定微阵列：使用链霉亲和素于步骤3）得到的固相载体上；

5）封闭微阵列：待差异蛋白抗体微阵列固定后，使用BSA或者甘油进行芯片封闭，静置后得到蛋白芯片。

7.根据权利要求6所述的一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片的制作方法，其特征在于，所述差异蛋白抗体包括：显著下调蛋白Cystatin-B与Leucine-richalpha-2-glycoprotein、显著上调蛋白Calmodulin与Talin-1、Gla、IFN-γ、RAB7A、TSP1、GAS6、PINP及NMID。

8.一种用于检测I型骨质疏松症的蛋白芯片的应用，其特征在于，获取样本后，将样本用生物素标记，与权利要求1所述的蛋白芯片共孵育，经过化学耦合后，再加入目标蛋白的生物素标记抗体；反应结束后，结合荧光和比色扫描，检测HRP-链霉亲和素或荧光素-链霉亲和素芯片信号，结合系统软件，将数据进行图像量化，标准化，并建立一定计算模型，执行数据分析和建模；采用SPSS 22.0统计软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差表示，并采用独立样本ｔ检验进行统计分析，计数资料采用卡方检验，以p0.05为差异有统计学意义，差异标准：AUC0.7。