[发明专利]一种冷冻电镜样品制备方法

权利要求书

1.一种冷冻电镜样品制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

预先设置冻样装置的湿度、温度和吸水时间并更换干燥滤纸；

向冻样装置内加入液氮预冷使后续加入到冻样装置内的气态乙烷或/和丙烷液化为-160℃～-40℃液态乙烷或/和丙烷；

用镊子夹取预处理的冷冻载网，将镊子固定在冻样装置的冻样杆上，在冷冻载网上添加含水样品使含水样品在冷冻载网上形成超薄液膜；

通过提高所述液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，使液膜中的水在-160℃～-40℃条件时在冷冻载网上形成高温玻璃态水，将样品包埋在玻璃态水中；

把包埋样品的冷冻载网放入液氮中保存待用。

2.根据权利要求1所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述通过提高液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，是把形成水膜的冷冻载网插入以1～50m/s的速度流动的所述液态乙烷或/和丙烷中进行冷冻。

3.根据权利要求1所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述通过提高液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，是使所述冻样杆以1～50m/s速度竖直下落、并在所述液态乙烷或/和丙烷中下落0.5～50cm的距离进行冷冻。

4.根据权利要求1所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述通过提高液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，是将所述冻样杆一端固定，连有镊子的另一端水平释放，使冻样杆靠自身重力或/和通过机械弹簧在冻样杆的固定端、或中间位置、或样品端竖直施加外力，实现冻样杆从水平位置开始在竖直平面内带动冷冻载网沿冻样杆的固定端做高速的圆周运动，使冷冻载网划过所述液态乙烷或/和丙烷进行冷冻。

5.根据权利要求2-4任一项所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述液态乙烷或/和丙烷的温度为-180℃～-160℃。

6.根据权利要求1所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述通过提高液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，是对冻样装置的制样室或对所述冷冻载网施加10～2100bar的压强对置于所述液态乙烷或/和丙烷中的冷冻载网上的液膜进行冷冻。

7.根据权利要求1所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述通过提高液态乙烷或/和丙烷与形成液膜的冷冻载网的相对运动速率来提高冷却速率对冷冻载网上的液膜进行冷冻，是向所述形成液膜的冷冻载网上以10～200m/s的速度喷射所述液态乙烷或/和丙烷进行冷冻。

8.根据权利要求3或4所述的冷冻电镜样品制备方法，其特征在于：所述镊子尖端细长，其尖端长1～10cm，宽0.01～0.5cm。