[发明专利]一种制备水稻根原生质体的组合物和方法有效
| 申请号： | 201910986194.X | 申请日： | 2019-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN110577925B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 谷晓峰;刘青 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 白凤莹 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 水稻 原生 质体 组合 方法 | ||
1.一种制备水稻根原生质体的方法，其特征在于：所述方法包括从水稻根尖分生区得到水稻根原生质体的步骤；所述水稻根尖分生区取自于水稻幼苗种子根萌发至3cm的种子根的根尖分生区；
所述从水稻根尖分生区得到水稻根原生质体还包括将水稻根尖分生区在酶解液中进行酶解，得到含有原生质体的酶解溶液，从所述酶解溶液中分离出水稻根原生质体；
所述酶解液由纤维素酶RS、半纤维素酶、离析酶R10、果胶酶Y-23、甘露醇、MES、CaCl2、牛血清蛋白、β-巯基乙醇、羧苄青霉素和水组成；其中，所述纤维素酶RS在酶解液中的含量为20g/L，所述半纤维素酶在酶解液中的含量为10g/L，所述离析酶R10在酶解液中的含量为7.5g/L，果胶酶Y-23在酶解液中的含量为5g/L，所述甘露醇在所述酶解液的含量为109.3g/L，所述MES在所述酶解液的含量为0.01mol/L，所述CaCl2在所述酶解液的含量为1mmol/L，所述牛血清蛋白在所述酶解液的含量为1g/L，所述β-巯基乙醇在所述酶解液的体积百分含量为0.04％，所述羧苄青霉素在所述酶解液的含量为50mg/L；
所述酶解为在真空状态下25-28℃以转速A避光酶解2-2.5小时后再以转速B避光酶解0.5-1小时；其中转速A小于转速B；转速A为50-60rpm；所述转速B为70-80rpm。
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