[发明专利]一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910987165.5 | 申请日： | 2019-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN110615839A | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 秦爱建;王飞;王娅娟;林志娴;万志敏;钱琨;邵红霞;叶建强 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/40;C12N15/13;C12N15/85;A61K39/42;A61P31/16 |
| 代理公司： | 32224 南京纵横知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘妍妍 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 单克隆抗体 神经氨酸酶 禽流感 鸡源 哺乳动物表达载体 制备方法和应用 哺乳动物细胞 生物医学技术 分泌表达 质粒共转 中和抗原 呈递 抗病毒 抗原 小鼠 源化 质粒 种鸡 重链 拼接 细菌 克隆 体内 | ||
1.一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。
2.一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
从分泌小鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取、扩增单克隆抗体的轻链自信号肽起始密码子至终止密码子的全长基因并克隆入哺乳动物表达载体中，获得表达轻链的质粒；
从分泌小鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取、扩增单克隆抗体的重链自信号肽起始密码子至CH1区末端的Fd片段序列，再从免疫鸡脾脏中提取扩增鸡IgY抗体自CH2 N端起始氨基酸密码子至终止密码子的Fc片段基因序列，将Fd片段与Fc片段拼接并克隆入哺乳动物表达载体中，获得表达重组重链的质粒；
上述两个质粒共转染到无血清培养的哺乳动物细胞，收集上清。
3.根据权利要求2所述一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的哺乳动物表达载体包括pCDNA3、pCDNA3.1、pCMV、pCAGGS、pIRES。
4.根据权利要求2所述一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的哺乳动物细胞包括293T细胞、COS-1细胞、COS-7细胞、sp2/0细胞或CHO细胞。
5.根据权利要求2所述一种鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述的鸡IgY抗体自CH2 N端起始氨基酸密码子至终止密码子的Fc片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
6.一种编码如权利要求1所述抗体的核苷酸分子。
7.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求6所述的核苷酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求6所述的核苷酸分子或如权利要求7所述的表达载体。
9.一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的单克隆抗体。
10.根据权利要求1所述鸡源化抗禽流感神经氨酸酶单克隆抗体在体外识别抗原和/或中和病毒中的应用。
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