[发明专利]一种油茶再生体系的再生方法

说明书

本发明属于植物组织再生技术领域，具体涉及一种油茶再生体系的再生方法。所述油茶再生体系的再生方法，包括：愈伤诱导培养、愈伤分化培养、生根培养和幼苗驯化；所述愈伤诱导培养为暗培养，其采用的愈伤诱导培养基包括激素组分、防褐化剂及30‑80g/L的蔗糖。本发明采用暗培养的愈伤诱导培养方式，同时向愈伤诱导培养基中添加特定激素组分、防褐化剂以及提高蔗糖浓度，通过多重手段系统作用促使油茶叶片愈伤诱导率及分化率显著提升。所述再生方法能够显著提高油茶组培育苗的效率，同时为构建油茶遗传转化体系奠定基础。

技术领域

本发明属于植物组织再生技术领域，具体涉及一种油茶再生体系的再生方法。

背景技术

油茶(Camellia oleifera)是山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)的常绿小乔木或灌木，是我国特有的优质木本油料树种，与油棕、椰子和油橄榄并称为世界四大木本油料树种。

茶油中含有90％左右的不饱和脂肪酸、富含维生素E、维生素D、维生素K和维生素A，同时含有微量的角鲨稀、黄酮、茶多酚和山茶甙等。经常食用茶油可预防心血管硬化、降血压、降血脂等，因此茶油被公认为是一种理想的营养保健食用油。

茶油在工业上可作为润滑油和防锈油，可以制取油酸及其酯类、生产肥皂和凡士林等；在医药上，可用于制作针剂和调制各种药膏、药丸等；在化妆业上，通过精炼可制作成天然高级美容护肤系列化妆品；籽榨油后的枯饼，可提取残油、茶皂素，发酵后可作高蛋白饲料，粉碎后可以用来作生物杀虫剂、肥料和机床的抛光粉等；油茶籽壳中含有茶皂素、茶籽多糖、茶籽蛋白等，它们都是化工、轻工、食品、饲料工业产品等的原料，还可制成糠醛、活性炭等，茶籽壳还是一种良好的食用菌培养基；油茶叶部含有花黄素、茶碱等，可做医药工业的原料；因此，油茶全身都是宝，具有重要的经济价值，同时具有重要的生态价值和社会价值。发展油茶产业对减少我国对国外进口食用油的长期依赖，提高我国国民经济和人民生活水平具有重要意义。

目前，油茶种苗繁育主要采用芽苗砧嫁接育苗，但芽苗砧嫁接育苗出圃时间长，而且受育苗季节的限制，同时由于不同油茶品种种子的芽苗砧对接穗的影响，导致同一品种油茶苗不同植株的生长性状存在不一致的现象；而通过油茶组织培养，可以进行快速育苗、提高育苗效率和保持优良品种的性状。

但是，目前油茶组织培养主要是进行带腋芽茎段进行组织培养，这种方法容易进行组培快繁，但茎段培养存在污染率较高的问题，而且无法进行再生培养；也有通过种胚进行组培快速育苗，但这种方法不能保持优良品种的性状；也有利用叶片进行组培再生的研究，但是叶片愈伤组织的诱导率较低，分化率很低，不能满足工厂化育苗的要求。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种油茶再生体系的再生方法。所述再生方法能显著提高油茶叶片愈伤组织诱导率及分化率，提高油茶组培育苗的效率，同时为构建油茶遗传转化体系奠定基础。

所述油茶再生体系的再生方法，包括：愈伤诱导培养、愈伤分化培养、生根培养和幼苗驯化；所述愈伤诱导培养为暗培养，其采用的愈伤诱导培养基包括激素组分、防褐化剂及30-80g/L的蔗糖。

本发明采用暗培养的愈伤诱导培养方式，同时向愈伤诱导培养基中添加特定激素组分、防褐化剂以及提高蔗糖浓度，通过多重手段系统作用促使油茶叶片愈伤诱导率及分化率显著提升。

进一步地，所述愈伤诱导培养基选自以下配方中的一种：

愈伤诱导培养基配方1：1/2MS基本培养基(粉末)、0.5-3.0mg/L的2,4-D、0.5-2.0mg/L的TDZ、30-80g/L的蔗糖、7-9g/L的琼脂、100-500mg/L的水解酪蛋白、100-500mg/L的水解乳蛋白、50-200mg/L的脯氨酸、50-200mg/L的甘氨酸、50-200mg/L的谷氨酰胺、50-100mL/L的椰子水及防褐化剂，pH为5.6-5.8；