[发明专利]一种浙江红山茶花药离体培养获得再生植株的方法

权利要求书

1.一种浙江红山茶花药离体培养获得再生植株的方法，其特征在于，包括：将浙江红山茶的花药进行低温预处理，愈伤组织诱导培养，分化培养和生根培养；其中：

所述愈伤组织诱导培养采用暗培养；

所述愈伤组织诱导培养所采用的愈伤组织诱导培养基的配方为：MS基本培养基、0.5-2.0mg/L的2,4-D、0.1-2.0mg/L的KT、1-2.0mg/L的TDZ、30-80g/L的蔗糖、7-9g/L的琼脂、100-500mg/L的水解酪蛋白、100-500mg/L的水解乳蛋白、70-200mg/L的脯氨酸、70-200mg/L的甘氨酸、70-200mg/L的谷氨酰胺、40-100mL/L的椰子水，以及防褐变剂，并调整pH为5.5-5.8；所述防褐变剂选自1-2g/L的交联聚维酮、100-500mg/L的维生素C或5-20mg/L的硝酸银中的至少一种；

所述分化培养所采用的所述分化培养基为：1/2MS培养基、0.05-0.3mg/L的NAA、1.0-3.0mg/L的6-BA、0-0.5mg/L的TDZ、30-50g/L的蔗糖、7-10g/L的琼脂、100-500mg/L的水解酪蛋白、100-500mg/L的水解乳蛋白、70-200mg/L的脯氨酸、70-200mg/L的甘氨酸、70-200mg/L的谷氨酰胺、40-100mL/L的椰子水，以及防褐变剂，pH调整为5.5-5.8；所述防褐变剂选自1-2g/L的交联聚维酮、100-500mg/L的维生素C或5-20mg/L的硝酸银中的至少一种；

所述生根培养包括：将不定芽体转接到生根培养基中，1800-2400lux光照培养15-18h，然后培养28-35天长出不定根，待生根幼苗长至3-5cm后移栽到混合育苗基质中进行驯化培养，然后移到大棚或苗圃中进行常规管理；

所述生根培养基为：1/2或1/4的MS基本培养基、0.6-1.0mg/L的NAA、0.1-0.5mg/L的IBA、0.5-1.0mg/LGA3、10-30g/L蔗糖、2.3-2.6g/L的植物凝胶，pH为5.5-5.8；

所述混合育苗基质是由蛭石、珍珠岩和泥炭土按照一定质量比例混合得到，质量比依次为1-2：1-2：3。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低温预处理包括：将花药置于2-6℃，1-10天。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低温预处理的温度为3-4℃，处理时间为3-7天。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养的条件为:培养温度为25℃±2℃，培养30-50天。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，接种量为每皿100-400粒。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培养的条件：暗培养，培养温度为25℃±2℃，25-30天继代一次，培养30-60天。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述花药的选择：选择10-12月份的晴天上午，采摘浙江红山茶的花蕾。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述花药在愈伤组织诱导培养之前，还须进行外植体消毒：将低温预处理后的花蕾用清洁剂和杀菌剂浸泡后，经流水冲洗后，置于无菌操作台中进行表面消毒。