[发明专利]一种临床级树突状细胞冻存液

说明书

本发明公开了一种临床级树突状细胞冻存液。本发明的细胞冻存液包括氨基酸组分、pH缓冲体系、白蛋白、渗透性保护剂和非渗透性保护剂。本发明的细胞冻存液用白蛋白代替了传统的牛血清，成分清晰，不含对人体有害且不可用于临床的物质，并降低了DMSO含量，导致本发明的细胞冻存液与传统冻存液相比，大大提高了细胞冻存效率。

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及一种细胞冻存液，具体涉及一种临床级树突状细胞冻存液。

背景技术

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一，其目的是在低温环境下减缓细胞的代谢活动并维持生命。在细胞悬液的冷冻过程中，冰晶的形成是导致细胞死亡的主要原因之一。影响细胞冻存的主要因素包括细胞冻存液和冻存速率。细胞冻存液作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，其作用是将需要冻存的细胞悬浮，并供给细胞生命代谢所需的营养物质，同时防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤。冻存速率对细胞存活率的影响有两种，一种是慢速冻存下的损伤，由于细胞脱水和细胞外培养基浓度过高所致；一种是快速冻存下的损伤，细胞死亡和冰晶的形成有较大相关性，不同的细胞所需的冻存速率不同。

在现有技术中冻存细胞常使用血清与DMSO混合的方法。传统方法具有以下缺陷：

(1)DMSO用量为10％，过低的DMSO浓度会导致冻存效果欠佳，但高浓度的DMSO有较大毒性，会对细胞体造成伤害；

(2)传统冻存液配方中使用血清，因动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致；血清成本高，每500mL血清价格可高达3000-4000元；取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性；血清的活体采集对动物有一定损害增加动物病原。另外，有研究表明长期与胎牛血清接触的细胞会对溶液介质中的胎牛血清发生内吞，内吞胎牛血清后的间充质干细胞有可能发生某些蛋白表达的变化，应用于人体后可发生异种动物蛋白引起的免疫反应，不能直接用于临床输注。因此，利用含有血清的冻存液冻存的细胞会给临床使用带来一定的风险。

(3)操作不便，每次冻存细胞需要先融化血清，而且冻存复苏之后的细胞成活率相对较低，特别是一些相对脆弱的细胞，并且复苏后需要换液，使用起来不方便。

因此，针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种临床级无血清细胞冻存液，该无血清细胞冻存液具有高效、低毒、无外源因子和易于使用等优点可广泛用于各种哺乳动物细胞的冷冻保存。

发明内容

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种临床级树突状细胞冻存液，所述细胞冻存液包括以下组分：白蛋白、氨基酸、pH缓冲体系、渗透性保护剂、非渗透性保护剂。

在本发明的具体实施方案中，白蛋白是重组人血白蛋白；重组人血白蛋白浓度为0.07g/mL，即7％(w/v)。

进一步，可用于本发明的氨基酸包括赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、酪氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、或丙氨酰-谷氨酰胺中的一种或几种。

在本发明的具体实施方案中，氨基酸是甘氨酸、脯氨酸、天门冬氨酸、丙氨酰-谷氨酰胺的组合；优选地，甘氨酸浓度为1*10^-4g/mL、脯氨酸浓度为1.2*10^-4g/mL、天门冬氨酸浓度为1.2*10^-4g/mL、丙氨酰-谷氨酰胺浓度为1*10^-4g/mL。

进一步，可用于本发明的非渗透性保护剂包括蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、羟乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮。