[发明专利]一种鲜烟叶中烟碱异构体的分析方法

权利要求书

1.一种鲜烟叶中烟碱异构体的分析方法，其特征在于，应用于分析烟叶中的手性叔胺-R/S烟碱，包括如下步骤：

S1、烟叶样品的预处理：先将采集的鲜烟叶样品进行放入液氮中进行速冻处理，然后采用冷冻干燥法干燥，干燥后将其研磨成粉末，得烟叶样品粉末备用；

S2、鲜烟叶样品中烟碱异构体的提取：称取冷冻烟叶样品粉末于离心管中，加入由乙腈配制的4, 4'-联吡啶内标溶液，加入质量分数5%氢氧化钠溶液，涡旋混匀，再加入二氯甲烷，涡旋提取，离心分层，取下层清液过有机滤膜，得提取液备用；

S3、烟碱异构体色谱干扰峰的衍生化净化：取提取液，加入(1S)-(-)-莰烷酰氯衍生化试剂与 20%质量分数的氢氧化钠水溶液碱性催化剂，涡旋反应，离心 ，取下层清液，得净化液备用；

S4、烟碱异构体反萃取富集：向净化液中加入0.5 M HCl反萃取溶剂，涡旋混匀后离心，用移液枪头取上层清液，得烟碱异构体溶液备用；

S5、液相色谱进样分离：在烟碱异构体溶液中加入氨水后，采用液相色谱法进样分离，具体采用全多孔材料Lux® 3 µm AMP 150 x 3.0手性色谱柱进行分离，色谱条件为：流动相A为有机相，体积比正丙醇：甲醇=80:20，流动相B为水相，10 mM的碳酸氢铵溶液，以体积比2.5%的浓缩氨水调节pH值，体积比20%的A与80%的B等梯度洗脱，柱温为30 ℃；检测波长262 nm；流速0.25 mL min^-1；进样量2 μL；压力为3083 psi，分体得S-烟碱异构体和R-烟碱异构体；

S6、鲜烟叶样品中烟碱异构体组成的定性及定量分析：采用S-烟碱异构体、R-烟碱异构体与外消旋体R/S-烟碱相应的保留时间进行定性，内标法进行定量，采用紫外检测器分析检测；

其中，所述冷冻干燥法处理步骤为：

a、烟叶样品预冻：将液氮冷冻后的烟叶样品在真空冷冻干燥仪中-20℃保持5 h；

b、第一阶段升华：在0℃下干燥15 h；

c、第二阶段升华：在20℃下干燥直至样品恒重。