[发明专利]一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取脐带上的华通氏胶，离体培养得脐带间充质干细胞，记为P0代；

（2）传代3～5次，即至P3～P5代后，更换无血清空白培养基；

（3）继续培养24 h~96 h；

（4）收集细胞上清液，离心，透析，收集截留液，冻干，获得冻干粉。

2.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于步骤（2）中传代用的MSC培养基。

3.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述的离心条件为：将上清液于2~6℃条件下，800~2000 rpm/min离心5~15 min，取上清。

4.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述的透析为：将上清液置于3～50 KD的透析袋内，透析袋置于PBS溶液中，0~6℃条件下进行透析24~48 h，收集透析液。

5.根据权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于步骤（4）的冻干条件为加入冻干保护剂，冻干，即得。

6.根据权利要求5所述的一种脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述冻干保护剂为：每100 mL所述脐带间充质干细胞因子，加入0~15 g甘露醇。

7.根据权利要求6所述的脐带间充质干细胞因子冻干粉的制备方法，其特征在于，步骤（4）所述冻干的过程为：

A、样品加入1~10 ml西林瓶中，1~5 ml/瓶

B、将冷肼温度降至-80~-60℃，箱体温度降至-60~-40℃；

C、西林瓶半压塞置于真空冷冻干燥机内，维持冷冻1~6 h；

D、将压强降至10~50 Pa；

E、以0.5 ~5℃/min的速度升温至-25~-17℃，维持10-~20 h；

F、将压强降至0~30 Pa；

G、以0.5 ~5℃/min的速度升温至0~25℃，维持1~10 h，结束冻干；

H、西林瓶压塞，取出。

8.脐带间充质干细胞因子冻干粉在制备皮肤美白、抗衰老、脱发药物中的应用，其特征在于所述脐带间充质干细胞因子冻干粉按权利要求1-7任意一种方法制备获得。