[发明专利]虚拟筛选在制备蛋白激酶抑制剂的应用和药物先导化合物

权利要求书

1.一种蛋白激酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)通过虚拟筛选方法获得候选化合物；

(2)将步骤(1)获得的候选化合物进行生物活性筛选，获得目标化合物；

步骤(1)中所述虚拟筛选为基于药效团模型和分子对接联用的虚拟筛选方法；

步骤(2)中所述生物活性筛选为激酶活性检测实验和抗肿瘤细胞增殖实验。

2.按照权利要求1所述的一种蛋白激酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤(1)药效团模型构建方法采用Discovery Studio 4.0软件，分子对接方法采用GOLD软件。

3.按照权利要求1所述的一种蛋白激酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤(2)激酶活性检测实验方法为ADP-Glo激酶活性检测方法，抗肿瘤细胞增殖实验方法采用CellCounting Kit-8(CCK-8)法。

4.按照权利要求1所述的一种蛋白激酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1.1、从Protein data bank中获取蛋白激酶CK2与抑制剂共晶的三维结构，依据结合的抑制剂保留并设定活性口袋；

S1.2、利用步骤S1.1获取的蛋白激酶CK2与抑制剂共晶的三维结构，构建基于受体蛋白激酶CK2的药效团模型，并运用此药效团模型作为查询式对小分子化合物库进行基于匹配度值的初步筛选，得到初筛化合物库；

S1.3、根据步骤S1.1设定的活性口袋，利用分子对接软件与步骤S1.2所筛选得到的化合物进行分子对接并打分排序，进一步筛选得到精筛化合物库，并通过评价对接分子与CK2的相互作用模式而得到候选化合物；

S2、使用步骤S1.3获得的候选化合物进行激酶活性检测实验和抗肿瘤细胞增殖实验，得到目标化合物。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤S1.1中，蛋白激酶CK2与抑制剂共晶的三维结构为现有蛋白质数据库中蛋白激酶CK2与抑制剂共晶的三维结构，或者蛋白激酶CK2与其他抑制剂共晶的三维结构；

步骤S1.2中，药效团模型构建方法为：运用Discovery Studio 4.0构建基于受体的药效团模型，采用已经确定的对受体有活性的分子物质和无活性的分子物质，并利用ScreenLibrary模块进行模型验证，获得的药效团模型包含3-5个有效的药效特征元素，并运用匹配度值为大于2.5-3.5筛选小分子化合物库，得到初筛化合物库；

步骤S1.2中所述小分子化合物库为ChemBridge片段库；

步骤S1.3中，所述分子对接程序优选为GOLD，或使用其他分子对接软件进行替代，例如：AutoDock vina、FlexX或Glide其中的一种或多种；

当使用GOLD进行对接打分时，使用Goldscore打分函数；

精筛化合物库优选为打分排名前20-100的化合物，候选化合物优选为6-10个与步骤S1.1中所述的蛋白激酶CK2与抑制剂共晶的三维结构具有相似作用模式的化合物。

6.权利要求1-5所述筛选方法得到的目标化合物为具有式Ⅰ、式Ⅱ所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：

7.权利要求6所述的如式Ⅰ、式Ⅱ所示结构的化合物或其药学上可接受的盐在制备蛋白激酶CK2抑制剂或/和抗肿瘤药物的应用。

8.一种如式Ⅰ、式Ⅱ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备蛋白激酶CK2抑制剂和/或抗肿瘤药物的应用；

9.权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备蛋白激酶CK2抑制剂和/或抗肿瘤药物的应用，其特征在于，式Ⅰ、式Ⅱ所示化合物具有一定的蛋白激酶CK2抑制作用，在化合物浓度为64μM时对蛋白激酶CK2的抑制率分别为60％和26％；在化合物浓度为256μM时对蛋白激酶CK2的抑制率分别为72％和40％；

式Ⅰ、式Ⅱ所示化合物具有一定的抗肿瘤细胞增值活性，肿瘤细胞株为人肺癌A549，其IC₅₀值分别为：23.08μM和8.81μM。