[发明专利]小鼠IgG印迹聚合物的制备方法

说明书

本发明公开一种小鼠IgG印迹聚合物的制备方法，依次按照如下步骤进行：将0.01~1mol丙烯酰胺和/或N‑羟基丙烯酰胺与0.002~0.02mol甲叉双丙烯酰共同溶于20 ml pH=7的PBS溶液中，超声震荡5min，得第一混合溶液；将0.001~0.01mol含溴化合物置入第一混合溶液中；在第一混合溶液中加入0.05~1ml三乙胺、0.002~0.02g小鼠IgG和0.4~4μg荧光标记的小鼠IgG，超声震荡20min，得第二混合溶液，向第二混合溶液中通入氮气10min；将通入氮气的第二混合溶液光照6小时，得到含小鼠IgG的聚合物；洗去含小鼠IgG的聚合物中的小鼠IgG模板。

技术领域

本发明涉及一种小鼠IgG印迹聚合物的制备方法，尤其涉及一种无需过渡金属催化剂且在水相中以荧光标记的小鼠IgG进行光诱导ATRP的小鼠IgG印迹聚合物的制备方法。

背景技术

动物进食时，免疫系统会产生特异性抗体IgG，IgG与食物形成免疫复合物，严重时可引起身体组织炎症。因此可以通过对IgG的检测，判断身体是否会对某种食物产生不耐受疾病，为疾病的诊断和预防提供依据。

检测特异性抗体IgG的方法通常为酶联免疫分析法（ELISA法）及分子印迹技术。ELISA法作为一项免疫检测技术，主要是基于抗原与抗体的特异性识别进行的，如果检测抗原，除了要求结合的抗体与抗原要有特异性外，检测抗原还必须有能与抗体相结合的抗原决定簇，若因突变导致某些位点不表达或结合位点因某些原因被封闭或阻断，就会影响抗原和抗体的结合，造成假阴性结果，同时该方法利用的抗原抗体具有生物活性，保存条件困难。分子印迹技术是一种新型高效分离技术，其分离作用来源于分子印迹聚合物（molecularly imprinted polymers，MIP）所具有的类似天然抗体或酶的分子识别功能，具有适应性强、化学稳定性高、对压力、温度极具耐受性等优点，同时，MIP的制备简单，重复性好。

分子印迹技术的核心是分子印迹聚合物（Molecularly imprinted polymer，MIP）的制备，通常是在合适引发剂的作用下，功能单体、交联剂和某一特定模板分子通过氢键、离子键、范德华力、静电力等作用下形成具有刚性结构的聚合物，然后通过一定的物理或化学方法将模板分子脱除，最终制备出具有选择性识别能力的分子印迹聚合物。能够制备MIP的方法很多。原子转移自由基聚合（Atom Transfer Radical Polymerization，ATRP）是高分子科学中的前沿课题，是大分子设计的常用手段，它以卤化物作为引发剂，低价态过渡金属（如Cu（Ⅰ）、Fe（Ⅱ）等）配合物作为催化剂，通过氧化还原反应，在聚合活性种与休眠种之间建立动态平衡，可以实现对聚合物的端基、组成、结构、分子量等的准确控制。同时ATRP可以应用于多种类型的单体，具有聚合方法简单、实施手段多样等优点，因此特别适合于MIP的制备。然而，如利用传统ATRP方法制备蛋白质MIP，存在如下问题：(1) 低价态过渡金属离子对空气等敏感而不易保存；(2) 低价态过渡金属离子对蛋白质等生物大分子具有一定的毒性；(3) 常见脱除催化剂的后处理工艺复杂，催化剂常有残留且必须加大成本。

无金属可见光诱导的原子转移自由基聚合是一种新兴技术，可以克服传统ATRP的缺点，无需过渡金属配合物作为催化剂即可制备分子印迹聚合物，具有单体聚合速度快、转化率高等优点，但是该方法的聚合发生在乙醇相中，而乙醇相则因易挥发、易燃，而存在着安全性差、成本高等问题。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种无需过渡金属催化剂且在水相中以荧光标记的小鼠IgG进行光诱导ATRP的小鼠IgG印迹聚合物的制备方法。

本发明的技术解决方案是：一种小鼠IgG印迹聚合物的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：

a. 将0.01~1mol丙烯酰胺和/或N-羟基丙烯酰胺与0.002~0.02mol甲叉双丙烯酰共同溶于20 ml pH=7的PBS溶液中，超声震荡5min，得第一混合溶液；