[发明专利]固液相结合制备特立帕肽的方法

说明书

本发提供了本发明公开了固液相结合制备特立帕肽的方法，本发明所述方法包括如下步骤：以2‑Cl‑CTC Resin为固相载体合成特立帕肽1‑15个氨基酸的全保护肽作为第一片段；以PS‑Wang Resin为固相载体合成特立帕肽16‑34个氨基酸的全保护肽作为第二片段；在液相里将第一片段和第二片段偶联，得到特立帕肽全保护肽，经裂解、纯化、冻干得特立帕肽成品。该方法可以有效的缩短50％的合成周期、降低缺失肽、消旋肽的生成，提高了总收率、降低物料成本，适合于工业化生产。

技术领域

本发明涉及多肽药物固相合成领域，特别涉及一种固液相结合制备特立帕肽的方法。

背景技术

中文名称：特立帕肽

英文名称：Teriparatide：

肽序结构：

H-Ser-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-Leu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-Val-His-Asn-Phe-OH

结构式：

Cas号：52232-67-4

分子量：4117.77

分子式：C₁₈₁H₂₉₁N₅₅O₅₁S₂

特立帕肽是内源性甲状旁腺激素具有生物活性的N-末端区域1-34氨基酸片段，由礼来公司研发，2002年12月首次在美国上市，用于原发性骨质疏松及性腺功能减退性骨质疏松、绝经后骨质疏松的治疗，特立帕肽的免疫学和生物学特性与内源性甲状旁腺素PTH以及完全相同，能够增加成骨细胞数目，增强其活性及阻止成骨细胞凋亡，并且，毒副作用小，且很少引发蓄积中毒，具有很广阔的市场前景。

目前，关于特立帕肽的制备方法，国内外已广为报道。原研厂家礼来采用基因表达的方式获得特立帕肽，除此之外，尚有多种基因表达方面的专利，例如CZ20100374A3中描述了一种用基因重组技术在大肠杆菌中表达，然后通过分离纯化技术得到成品的方法。US2017129935A1中介绍一种基于离子交换层析纯化特立帕的方法，该方法也是基于基因工程技术生产的特立帕肽。然而，基因表达法有着技术门槛高，工序复杂，三废严重等明显的缺陷。

另一种较为常见的特立帕肽制备方法是固相化学合成法，CN104017064A中描述了一种在肽链的16～17位采用假脯氨酸二肽的方式投料的方法，避免了特殊工艺杂质的产生，但无法避免因肽链过长所产生的多种缺失肽；CN104530218A中描述了一种采取传统的固相合成方法，由肽链C端向N端逐步合成特立帕肽的方法，虽然操作简便，但无法解决长肽后期偶联困难的问题，且最终目标肽纯度不高，纯化困难；CN105384809A中描述了一种，先通过液相合成二肽或是三肽，然后在固相合成的方法，该方法虽然一定程度上降低了缺失肽的产生，但增加了大量的液相二肽合成工作，工序繁琐；CN104910269中描述了一种使用HMP Linker作为固相载体，逐个偶联完成肽序合成的方法，该方法不能有效避免因逐个偶联而产生的缺失、消旋肽。

发明内容

为解决特立帕肽合成中存在的以上缺陷，本发明提供了片段法固液结合制备特立帕肽的新方法。

根据本发明技术方案的一方面提供了一种固液相结合制备特立帕肽的方法，该方法如下：

(1)固相合成特立帕肽1-15个氨基酸的全保护肽作为第一片段；

(2)以PS-Wang Resin为固相载体合成特立帕肽16-34个氨基酸的全保护作为第二片段；