[发明专利]小鼠子宫基质细胞的实用高效培养方法

权利要求书

1.小鼠子宫基质细胞的实用高效培养方法，其特征是，采用胰蛋白酶双温消化和胶原蛋白酶温和消化的双酶三温消化法，根据贴壁时间不同利用差速贴壁和差速消化分离培养小鼠子宫基质细胞。

(1)胰蛋白酶双温消化：用4℃预冷的含EDTA的0.2％胰蛋白酶(每个子宫组织3ml)，4℃消化1h后，室温消化15min，加入等体积的DMEM-F12完全培养基以及4倍体积的PBS，采用吸打—沉降法收集细胞悬液。

(2)胶原蛋白酶温和消化：向剩余未消化的组织中加入37℃预热的0.2％I型胶原蛋白酶(每个子宫组织3ml)，37℃消化40min；加入5倍体积的PBS，采用吸打—沉降法收集细胞悬液。

如有剩余未消化的组织按(2)重复2～3次。汇集所有细胞悬液。

(3)子宫基质细胞的分离培养：将获得的细胞悬液，过细胞筛，1000rpm离心7min，弃上清，加入DMEM-F12完全培养基，重悬细胞，计数，按照1.5×10⁵个/ml接种，在37℃、5％CO₂的培养箱中培养。培养1h后，镜下观察到纺锤形或多边形的基质细胞贴壁时，弃掉培养液，去除没有贴壁的其他细胞，加入完全培养基培养。注：此操作须在接种后2h之内完成。