[发明专利]用于RNA向导的基因调节和编辑的正交Cas9蛋白

说明书

提供了用于RNA向导的基因调节和编辑的正交Cas9蛋白。提供了调控细胞中的靶核酸的表达的方法，包括使用多重正交Cas9蛋白同时和独立调节相应的基因或者同时和独立编辑相应的基因。

相关申请数据

本申请要求于2013年7月10日提交的第61/844,844号的美国临时专利申请的优先权，并且该申请的全部内容针对所有目的通过引用结合于此。

政府权益声明

本发明在国立卫生研究院的授权号P50 HG005550以及能源部的DE-FG02-02ER63445下获得政府支持。政府对本发明享有一定权利。

背景技术

细菌和古细菌(archaeal)CRISPR-Cas系统凭借与Cas蛋白复合的短向导RNA引导存在于侵袭外来核酸内的互补序列的降解。参见Deltcheva,E.et al.CRISPR RNAmaturation by trans-encoded small RNA and host factor RNase III.Nature 471,602-607(201 1)；Gasiunas,G.,Barrangou,R.,Horvath,P.&Siksnys,V.Cas9-crRNAribonucleoprotein complex mediates specific DNA cleavage for adaptiveimmunity in bacteria.Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America 109,E2579-2586(2012)；Jinek,M.et al.A programmabledual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.Science 337,816-821(2012)；Sapranauskas,R.et al.The Streptococcus thermophilus CRISPR/Cassystem provides immunity in Escherichia coli.Nucleic acids research 39,9275-9282(2011)；和Bhaya,D.,Davison,M.&Barrangou,R.CRISPR-Cas systems in bacteriaand archaea:versatile small RNAs for adaptive defense and regulation.Annualreview of genetics 45,273-297(2011)。最近化脓性链球菌(S.pyogenes)II型CRISPR系统的体外重构证实了融合至通常反式编码tracrRNA(“反式激活的CRISPR RNA”)的crRNA(“CRISPR RNA”)足以引导Cas9蛋白序列特异性裂解匹配crRNA的靶DNA序列。表达与靶位点同源的gRNA导致Cas9的招募(recruitment)和靶DNA的降解。参见H.Deveau et al.,Phageresponse to CRISPR-encoded resistance in Streptococcus thermophilus.Journalof Bacteriology 190,1390(Feb,2008)。

发明内容