[发明专利]一种提高毛细管电泳重复性的方法有效

专利信息
申请号: 201910999844.4 申请日: 2019-10-21
公开(公告)号: CN110596225B 公开(公告)日: 2022-03-18
发明(设计)人: 蒲巧生;孙萍;王远航;赵蕾;陶俊宏 申请(专利权)人: 兰州大学
主分类号: G01N27/447 分类号: G01N27/447
代理公司: 兰州智和专利代理事务所(普通合伙) 62201 代理人: 周立新
地址: 730000 甘肃*** 国省代码: 甘肃;62
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 毛细管 电泳 重复性 方法
【权利要求书】:

1.一种提高毛细管电泳重复性的方法,其特征在于,该方法为:

使用包含至少两种不同检测模式的共检测位点的毛细管电泳检测器进行分析物和参考物的检测,分别得到分析物检测信号电泳谱图和参考物检测信号电泳谱图;读出电泳谱图中各信号峰的迁移时间和峰面积;通过参考物在电泳谱图中的迁移时间和峰面积,对分析物的迁移时间和峰面积进行校准计算,并以相对标准偏差值评估校准前后电泳峰的重复性,得到毛细管电泳分析物电泳谱图的重复的结果;

该方法具体按以下步骤进行:

1)使用毛细管电泳检测系统,该检测系统中包含至少两种不同的检测模式;用该毛细管电泳检测系统进行检测时,待分析物和参考物同时进样,用一种检测模式检测待分析物,用另一种检测模式检测参考物,即参考物检测模式与待分析物检测模式不同;不同的检测模式共用一个检测位点;在有效分离的情况下,同时得到不同检测模式下的电泳谱图,即分别得到待分析物的电泳谱图和参考物的电泳谱图;

2)以待分析物的电泳谱图作为分析信号,以参考物的检测信号作为参考信号;

3)通过电泳谱图得到该电泳谱图中各信号峰的迁移时间,对电泳谱图进行积分得到各信号峰的峰面积;

即,将待分析物的电泳迁移时间定义为t1,t2,…,tn,将待分析物的电泳峰面积定义为A1,A2,…,An,将参考物的电泳迁移时间定义为tR1,tR2,…,tRn,将参考物的电泳峰面积定义为 AR1,AR2,…,ARn,其中1,2,…,n代表参考物和待分析物的数量;

峰面积校准采用公式

进行计算,(3)式中,Ai,cal为校准后的分析物i的峰面积;Ai为校准前的分析物i的峰面积;ARj为参考物j的峰面积;为参考物的平均峰面积;

最后,得到校准后的分析物电泳谱图。

2.根据权利要求1所述的提高毛细管电泳重复性的方法,其特征在于,所述步骤3中,

以参考物的迁移时间为基准,对待分析物的迁移时间进行校准;校准采用单点校准法或两点校准法;单点校准法用于只有一个参考物的情况中,按公式

进行计算,(1)式中,ti,cal为校准后的第i个待分析物的迁移时间;为距离该待分析物i最近的参考物j的平均迁移时间;tRj为参考物的迁移时间;

两点校准法对迁移时间的校准适用于含有两个至多个参考物的情况中,按公式

进行计算;(2)式中,分别为参考物j和n的平均迁移时间;tRn,tRj分别为参考物n和j的迁移时间;ti为待分析物的迁移时间,tRj<ti<tRn

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