[发明专利]一种降低GVHD发病率的移植物

说明书

本发明实施例公开了一种降低GVHD发病率的移植物，其特征在于，所述移植物通过将胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞混合培养得到；本发明通过将胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞共同培养制备得到移植物，通过将该移植物进行回输，能够有效降低CVHD的发变绿和发病程度。

技术领域

本发明实施例涉及造血干细胞移植技术领域，具体涉及一种降低GVHD发病率的移植物。

背景技术

移植物抗宿主疾病(GVHD)是骨髓移植后出现的多系统损害(皮肤、食管、胃肠，肝脏等)的全身性疾病，是造成死亡的重要原因之一。由于供受体之间存在着免疫遗传学差异，移植骨髓中的免疫活性细胞(主要是T淋巴细胞)识别了受体的不同组织相容性抗原而增生分化，在受体内增生到一定程度后把受体的某些组织或器官作为靶目标进行免疫攻击产生损害。

将同种反应性T淋巴细胞移植至免疫功能不健全的患者体内时，可能发生的一种潜在的可致死性临床并发症。供体T细胞一经被输注至受体体内，就会识别宿主细胞抗原，导致影响肝脏、胃肠道和皮肤的免疫级联反应。目前，GVHD的治疗和预防方法包括移植后进行常规免疫抑制、低强度预处理及在输注前耗竭或抑制同种反应性供体的T淋巴细胞。不过，这些方法的临床效果受多种副作用的限制。例如，常规免疫抑制与增加再次感染病毒及机会性病毒感染的风险有关联，而低强度预处理方案则与复发率增加有关联。目前，耗竭或抑制供体T淋巴细胞是最具前景的GVHD预防性治疗方法。通过淋巴细胞毒性剂、专用的T淋巴抑制剂及专门针对C0.9％NaCl生理盐水34+造血干细胞和祖细胞(HSPC)选择的T细胞耗竭剂等多种方法，可实现该目的。尽管人们已经证实，这些方法可有效地降低GVHD发病率，但是，它们会降低受体重构免疫系统的速度，增加患者出现致命感染的危险并可能具有限制移植物抗白血病的效果；此外，现有技术直接将造血干细胞移植，临床GVHD发病率较高。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种降低GVHD发病率的移植物，以解决现有技术中GVHD发病率较高的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

根据本发明实施例的第一方面提供一种降低GVHD发病率的移植物，所述移植物通过将胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞混合培养得到。

本发明通过将胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞共同培养制备得到移植物，通过将该移植物进行回输，能够有效降低CVHD的发变绿和发病程度。

进一步地，所述胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞的数量比为(4-6)∶1。

进一步地，所述培养具体为：

将胎盘亚全能干细胞和脐带血造血干细胞的混合细胞按照2×10⁶cell/瓶进行接种，每个培养瓶中的培养体系为15mLDMEM F12+10ng/ml EGF+10ng/ml bFGF液，然后盖盖，再将培养瓶置5％CO₂、饱和湿度、37℃培养箱中培养。

进一步地，所述胎盘亚全能干细胞通过如下方法制得：

(a)选取胎盘羊膜并进行预处理；

(b)将清洗后的羊膜进行消化处理、过滤、离心、接种；

(c)对接种后的细胞进行培养扩增，即得所述胎盘亚全能干细胞。

进一步地，所述预处理为将羊膜置于含50mL 0.9％NaCl生理盐水液的无菌小烧杯内，用镊子反复涮洗后取出放入新的无菌烧杯中加入0.9％NaCl生理盐水液再次涮洗，如此用0.9％NaCl生理盐水清洗3次以上，去除溶血，再用镊子将羊膜取出放置在肾形盘上，去除黏膜和溶血组织，将羊膜分成3-4cm大小方块；再将处理后的羊膜移至含50mL0.9％NaCl生理盐水液的新的无菌烧杯内，反复涮洗后放入新的烧杯中加入0.9％NaCl生理盐水液再次涮洗，如此反复冲洗16次以上。