[发明专利]用于区分毛橘红和光橘红原料植物的分子标记及其应用

说明书

本发明涉及一种用于区分毛橘红和光橘红原料植物的分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述分子标记位于编码类黄酮3’‑羟化酶的基因上游0‑1kb处。本发明还提供了上述分子标记的应用以及区分毛橘红和光橘红原料植物的方法。本发明提供的分子标记不受果树生长阶段的限制，并且通过分子标记的方法进行检测准确可靠，操作方便。

技术领域

本发明涉及分子标记及其应用，具体涉及一种用于区分毛橘红和光橘红原料植物的分子标记及应用。

背景技术

化州柚(Citrus grandis Osbeck var.tomentosa Hort.)为芸香科柑橘属柚类变种(中药大辞典)，主产于广东省化州市，是道地中药材“化橘红”的原料植物。化橘红原材料品种复杂，可分为毛橘红和光橘红，毛橘红主要包括来自于正毛、副毛和假西洋等多个化州柚种质的果实，光橘红则主要来自于包括光青、琯溪蜜柚、沙田柚等普通柚种质的果实。市场上，化州柚是生产毛橘红的原料果实，毛橘红果肉酸苦不能鲜食，而大多数普通柚成熟果肉具有良好食用价值。化州柚以未成熟或近成熟干燥果皮(黄皮层和白皮层)入药，具有良好的祛痰止咳功效。

前人研究发现，化州柚果实黄皮层中含有丰富的类黄酮、多糖化合物和挥发性油，其主要药理成分为类黄酮且以柚皮苷含量最高，类黄酮含量比较分析表明，其中正毛、副毛和假西洋均属于化州柚，以正毛为首的毛橘红原料果实中类黄酮含量显著高于光橘红。因此，目前广东、广西一带新兴大规模化橘红产业园主要种植正毛等化州柚。但是，市场上橘红鲜果收购并没有统一标准，果实收购季节，果农多以普通柚果实掺入化州柚果实一同售卖，但普通柚的掺入会极大降低化橘红成品的药用价值。采摘后的鲜果在果皮受损时，很难直观分辨化橘红和光橘红，这对于标准化和高品质化的化橘红成品生产是一种极大的挑战。

近年来许多学者对多种化橘红原料植物种质资源进行分型分析，但除了毛橘红原料植物果实的类黄酮含量显著高于光橘红外，还未有分子标记可以明显区别毛橘红和光橘红的原料植物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可以明显区分毛橘红和光橘红原料植物的分子标记。

发明人在研究柑橘类黄酮代谢途径相关基因功能时发现，大多数基因从序列上无法区分毛橘红和光橘红原料植物，但是在扩增类黄酮3’-羟化酶基因及其启动子序列时发现，化州柚一条序列的启动子相较于普通柚有一段序列插入，而另一条序列的启动子与普通柚序列一致。可以开发针对类黄酮3’-羟化酶基因的启动子的分子标记，用以区分毛橘红和光橘红的原料植物。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种用于区分毛橘红和光橘红原料植物的分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述分子标记位于编码类黄酮3’-羟化酶的基因上游0-1kb处。

第二方面，本发明提供了一种用于检测上述分子标记的引物对，引物序列可以根据分子标记前后的序列进行设计，需要满足既能同时扩增毛橘红和光橘红原料植物的类黄酮3’-羟化酶基因启动子序列，又能从扩增的序列长度上将毛橘红和光橘红的原料植物进行区分，本发明提供的所述引物对分别具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。

第三方面，本发明提供了检测上述分子标记的试剂盒，所述试剂盒包含上述引物对，还可以包括Taq酶、dNTPs。

第四方面，本发明提供了上述分子标记在区分毛橘红和光橘红原料植物中的应用。

第五方面，本发明提供了上述引物对在区分毛橘红和光橘红原料植物中的应用。

第六方面，本发明提供了上述试剂盒在区分毛橘红和光橘红原料植物中的应用。