[发明专利]一种长链非编码RNA及其干扰RNA在治疗动脉粥样硬化中的应用

说明书

本发明公开了一种长链非编码RNA及其干扰RNA在治疗动脉粥样硬化中的应用。本发明通过对动脉粥样硬化小鼠模型的主动脉组织进行高通量测序，发现了一种长链非编码RNA(lncRNA)分子在正常与晚期动脉粥样硬化小鼠主动脉组织中表达显著差异，同时该lncRNA分子在动脉粥样硬化组织中的高表达，将该lncRNA分子命名为lncRNA‑AFIAR。实验证明lncRNA‑AFIAR具有增强巨噬细胞增殖、抑制巨噬细胞凋亡等功能，参与了促进动脉粥样硬化的进展这一过程。通过对lncRNA‑AFIAR进行抑制可以达到抑制巨噬细胞增殖、减少斑块形成进而达到抑制AS的进展的目的。因此，本发明的提出为诊疗动脉粥样硬化提供了新的分子标记和干预靶点，也为动脉粥样硬化的治疗提供了新的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种长链非编码RNA及其干扰RNA在治疗动脉粥样硬化中的应用。本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

2018年1月，国家心血管病中心发布了《中国心血管病报告2017》。其指出，2017年，我国冠状动脉粥样硬化性心脏病患者达1100万，总体上看，中国心血管病患病率及死亡率仍处于上升阶段，且今后10年心血管病患病人数仍将快速增长。而冠心病作为心血管疾病的高发病症，是全球死亡率最高的疾病之一，根据世界卫生组织2011年的报告，中国的冠心病死亡人数已列世界第二。

动脉粥样硬化被认为是一种慢性炎症反应，在其反应过程中，巨噬细胞逐渐地聚集在扩张的动脉壁上，部分在病灶内，吞噬脂质，产生多种炎症介质，加重疾病。巨噬细胞的积聚实际上并不依赖于单核细胞的补充，而是依赖于局部巨噬细胞的增殖。因此巨噬细胞的增殖与凋亡与动脉粥样硬化的发生发展密不可分。

长链非编码RNA(long non coding RNA，lncRNA)，是一类转录本大于200nt(nucleotide)，并且不能翻译成蛋白质的功能性RNA分子，大部分lncRNA是由RNA聚合酶Ⅱ催化转录而来，在组织和细胞中表现出较强的特异性。近年来关于lncRNA的研究进展迅猛，但是绝大部分的lncRNA的功能仍然是不清楚的。本发明借助在动脉粥样硬化动脉组织全转录组高通量测序中筛选出一种表达量高、差异性大的lncRNA分子，命名为lncRNA-AFIAR，并通过对其功能的检测，进一步发现了lncRNA-AFIAR与动脉粥样硬化疾病的关系，有助于我们更好的理解其发病机制，从RNA水平为动脉粥样硬化提供新的诊疗靶点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在动脉粥样硬化组织相对于正常动脉组织中表达量显著升高的lncRNA及其干扰RNA，以及上述lncRNA在作为新靶点治疗动脉粥样硬化中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明通过对小鼠动脉粥样硬化模型中的动脉组织进行全转录组高通量测序，筛选到一种长链非编码RNA，命名为lncRNA-AFIAR，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，该lncRNA-AFIAR在动脉粥样硬化组织对比非动脉粥样硬化组织中的表达量明显增高。设计有关lncRNA-AFIAR荧光定量PCR扩增的引物序列以及沉默lncRNA-AFIAR(siRNA)序列。荧光定量PCR实验进一步证明了高通量测序结果，提取小鼠动脉粥样硬化组织提取RNA，反转录合成cDNA，使用设计的lncRNA-AFIAR PCR引物进行PCR扩增，首次获得扩增后产物。构建lncRNA-AFIAR沉默小鼠巨噬细胞RAW264.7，研究lncRNA-AFIAR在RAW264.7细胞的增殖、凋亡等功能中的作用，从而探求lncRNA-AFIAR在动脉粥样硬化中的作用机制。通过lncRNA-AFIAR对巨噬细胞的调控功能，我们发现lncRNA-AFIAR在动脉粥样硬化整个发生发展过程中发挥着重要的作用，LncRNA-AFIAR siRNA通过抑制巨噬细胞增殖、减少斑块形成来抑制AS的进展。

在上述研究的基础上，本发明提出了一种长链非编码RNA，命名为lncRNA-AFIAR，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。