[发明专利]一种表达IBDV的VP2蛋白的重组Ⅰ型马立克氏病病毒

说明书

本发明构建了一株表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒。本发明利用同源重组技术，将包含传染性法氏囊病病毒VP2基因和CMV启动子序列的基因片段CMV‑VP2及两端含FRT识别位点的Kana基因插入到鸡马立克氏病病毒弱毒疫苗SC9‑1株的UL45/UL46基因之间，构建获得在UL45/UL46基因间插入CMV‑VP2表达框和Kana表达框的重组质粒，而后通过阿拉伯糖诱导产生FLP重组酶，识别FRT位点，将Kana基因诱导掉，得到只含有CMV‑VP2表达框的重组质粒，由其拯救获得表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株。本发明获得的疫苗株具有与亲本毒SC9‑1疫苗株同等的体外复制能力以及良好的遗传稳定性，并且能够同时抵抗MDV超强毒株以及IBDV超强毒株的攻击。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种表达传染 性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立克氏病毒株，该重组病毒免疫家禽可用于 传染性法氏囊病及马立克氏病的预防。

技术背景

鸡马立克氏病(Marek’s disease，MD)和传染性法氏囊病(Infectious bursaldisease,IBD)是常见的两种影响家禽生产性能的免疫抑制病。其中，IBD是由鸡 传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的禽类急性、高度 接触性免疫抑制性传染病，该病主要感染3周龄～12周龄青年鸡，可通过导致鸡 法氏囊损伤、引起免疫抑制和雏鸡死亡等对家禽养殖造成巨大的经济损失。因 此，几十年来，该病一直威胁着养禽业的发展。抗原变异、免疫抑制，特别是 超强毒株(vvIBDV)的出现，使得该病的防控形势更加严峻。国际兽医局(OIE)认 为IBD已经成为影响社会经济的重要疾病。

研究表明IBDV基因组由两个双股RNA节段组成，分别为A节段和B节 段。A节段编码的VP2蛋白构成病毒的外衣壳，是IBDV的主要结构蛋白。VP2 蛋白可以诱导机体产生中和抗体，是IBDV主要的宿主保护性抗原。

IBD的免疫预防已成为目前防控该病的主要措施，而商品化的传染性法氏 囊病活疫苗分为弱毒、中等毒力和强毒三类。弱毒活疫苗对有母源抗体鸡群的 免疫保护效果不理想。与弱毒疫苗相比，中等毒力和强毒疫苗的免疫保护力虽 然高很多，但由于其具有一定的致病性，对法氏囊有一定的损伤。同时，由于 受母源抗体干扰及IBDV的特点，导致传统疫苗在实际应用中形成不可避免的 免疫空白期。因此，针对传染性法氏囊病新型疫苗的研究成为目前的热点之一。 IBDV的VP2蛋白是主要的免疫保护性抗原，针对VP2蛋白的中和抗体可抵御 IBDV强毒株的攻击，因此构建表达IBDV-VP2基因的重组活载体疫苗具有潜在 的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组马立 克氏病毒株，该重组病毒免疫家禽可用于传染性法氏囊病及马立克氏病的预防。 该病毒株可用于家禽中诱导针对IBDV的保护性免疫应答，并可预防马立克氏 病，从而弥补现有疫苗市场的不足。

本发明所提供的表达IBDV-VP2基因的重组Ⅰ型马立克氏病毒株，是将用 于表达VP2基因的VP2基因表达框插入到Ⅰ型马立克氏病毒的UL45区和UL46 区之间制备的。

更具体的，所述的插入位点位于Ⅰ型马立克氏病毒基因组UL45区和UL46 区之间的103909nt-103910nt之间；

所述的VP2基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明提供的重组马立克氏病毒，其插入的VP2基因表达框中IBDV-VP2 基因的调控元件由CMV启动子负责VP2基因的起始转录，BGH ployA终止子 为VP2基因mRNA转录提供终止信号，同时为mRNA 3’端添加polyA尾巴；

所述的VP2基因表达框，其一种具体的核苷酸序列为SEQ ID NO:3；