[发明专利]一种中国被毛孢的培养方法

说明书

本发明涉及一种中国被毛孢接种培养方法，其包括以下步骤：中国被毛孢分生孢子悬浮液，接种到培养基中在16～20℃恒温室内遮光培养7～10d。所述中国被毛孢分生孢子悬浮液的配制包括以下步骤：将中国被毛孢分生孢子斜面菌丝，加入吐温80溶液震荡均匀后，用中速滤纸过滤纯化后，葡萄糖溶液稀释得到悬浮液备用。本发明方法省去了液体菌种培养过程，直接跳过液体菌种培养过程，又由于分生孢子萌发周期比菌丝复苏且分生孢子活力比菌丝高，大大缩短培养周期。

技术领域

本发明涉及一种冬虫夏草领域，具体涉及一种中国被毛孢培养方法。

背景技术

中国被毛孢，指的是在冬虫夏草菌无性阶段的分离和鉴定发表的物质，是无性型阶段的冬虫夏草。

中国被毛孢接种技术方面，包括液体发酵接种和固体发酵接种，目前应用最多的方法就是使用液体培养的液体菌种进行接种，采用这种方法的优点就是接种效率高、菌丝生长快、污染低。但中国被毛孢最大的缺点就是菌丝复苏慢、生长缓慢，生长周期长，这一特点是中国被毛孢本身决定的，采用液体菌种进行后期培养接种，会使周期长、效率低。

鲁东大学曾申请过《蛹虫草斜面固体菌种有效替代液体菌种的蛹虫草培养方法》(专利号：CN105733957A)的发明专利，专利中提到直接采用固体菌种代替液体菌种进行接种，方法是将固体菌种与葡萄糖溶液进行混合，然后直接进行接种，此方法确实可以缩短周期。但是其采用的是固体培养基，并固体培养基与葡萄糖溶液直接混合进行接种，需要将斜面菌种与葡萄糖注射液混合后从针头挤出，再混合的多次的方式容易混入杂质，接种的菌种中不仅仅包括分生孢子，还包括杂质或者杂菌，降低生产效率；该专利中也未有任何记载其可减少蛹虫草种性的退化。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种通过悬浮液法培养缩短栽培周期、提高培养效率的中国被毛孢接种培养方法。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种中国被毛孢接种培养方法，其包括以下步骤：将中国被毛孢分生孢子悬浮液，接种到培养基中在16～20℃恒温室内遮光培养7～10d。

进一步的，所述中国被毛孢分生孢子悬浮液的配制包括以下步骤：将中国被毛孢分生孢子斜面菌丝，加入吐温80溶液震荡均匀后，使吐温80溶液中分生孢子的数量为10⁶～5×10⁷个/mL，使用中速滤纸过滤纯化后，葡萄糖溶液稀释得到悬浮液备用。

进一步的，所述吐温80溶液的浓度为0.01～0.05％，吐温80溶液的体积为6～10mL；

进一步的，所述葡萄糖溶液的质量浓度为2％～5％，用葡萄糖溶液稀释的倍数为5～10倍。

进一步的，所述培养基中包括以下重量份百分比的组分：大米1.5～3.5％、蛋白胨0.3～0.7％、蔗糖1～3％、MgSO₄为0.5～1.3％、磷酸二氢钾为0.1～0.4％、维生素B1为0.05～1.3％份和余下重量百分比的无菌蒸馏水。

进一步的，所述培养基中包括以下按重量/体积百分比的组分：土豆15～25％、葡萄糖2～5％、酵母粉0.5～1.5％、奶粉1.5～2.5％、CaCl₂·2H₂O为0.02～0.05％、MgSO₄·7H₂O为0.03～0.07％、KH₂PO₄为0.05～0.15％、NaCl为0.07～0.15％和余下重量百分比的无菌蒸馏水。

进一步的，所述中国被毛孢分生孢子悬浮液与培养基按体积百分比为0.5～1％进行接种。

本发明的原理是：