[发明专利]蓝光激活(S)-blebbistatin分子杀灭耐药性鲍曼不动杆菌的应用及方法

说明书

本发明涉及蓝光激活(S)‑blebbistatin分子杀灭耐药性鲍曼不动杆菌的应用及方法。本发明使用(S)‑blebbistatin分子协同蓝光，(S)‑blebbistatin分子在蓝光下照射产生强氧化性的羟自由基(^·OH)，可以杀灭耐药鲍曼不动杆菌。将(S)‑blebbistatin与菌液混匀置于蓝光下照射后涂抹或点板在平板表面一段时间之后可观察到临床耐药性鲍曼不动杆菌均被杀死。随着时间增加杀菌效率提高，而在无光条件下不存在诱导耐药风险的出现。本发明不受细菌耐药性限制，为临床多重耐药性鲍曼不动杆菌的治疗提供坚实有力的技术支撑。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及蓝光激活(S)-blebbistatin分子杀灭耐药性鲍曼不动杆菌的应用及方法。

背景技术

鲍曼不动杆菌属于非发酵的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然环境以及人体皮肤、消化系统、泌尿系统等，主要感染人群为ICU重症病人和老年抵抗力低下者。鲍曼不动杆菌主要针对外伤感染，如呼吸机相关肺炎。鲍曼不动杆菌的耐药表型较突出，尤其对碳青霉烯类抗生素、奎诺酮类抗生素表现出较强的耐药性。随着多重耐药鲍曼不动杆菌的出现使得替加环素与多粘菌素类抗生素成为最后防线，但是此两类药品也存在较强的副作用和药动力不佳等问题。目前由于新型抗生素研发严重缺乏，亟需寻找替代性的杀菌方法弥补抗生素的不足。蓝光依赖的光活疗法是目前比较有吸引性、具有应用前景的疗法。该方法由光直接调控不会对细菌产生基因突变或诱导耐药性。蓝光协同光敏剂随着时间增加杀菌效率提高，而在无光条件下不存在诱导耐药风险的出现。

(S)-blebbistatin分子是一种具有左旋手性的小分子化合物，也是肌球蛋白IIATP酶活性的选择性抑制剂。Li(M.D.Li，N-K Wong,et al.J.Am.Chem.Soc.140(46):15957-15968(2018))等公开(S)-blebbistatin分子在蓝光照射下可产生氧化性极强的羟自由基(^·OH)，但Li等先前采用的是人和小鼠皮胃肿瘤细胞模型，对肿瘤细胞的使用剂量是10到25μM(25μM为(S)-blebbistatin水溶性上限值)，其效率不佳，(S)-blebbistatin对哺乳类动物细胞的毒性效果不明显，从而影响其抗肿瘤的应用。目前化学体系中产生羟自由基的方法有多种，比如芬顿反应、紫外照射，但它们存在给药困难或安全性低等问题，并不适合应用于抗感染治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供蓝光激活(S)-blebbistatin分子杀灭耐药性鲍曼不动杆菌的应用及方法，在蓝光下该方法具有极高效的杀菌作用，避免了杀菌中细菌产生突变或诱导耐药性，以解决现有技术存在的问题。

蓝光激活(S)-blebbistatin分子在杀灭耐药性鲍曼不动杆菌的应用。

优选的，所述蓝光波长为420nm。

所述耐药鲍曼不动杆菌为耐广谱青霉素类、喹诺酮类、β-内酰胺类、单酰胺环类、氨基糖苷类、多肽类其中三类抗生素即为耐药。

一种以蓝光激活(S)-blebbistatin分子杀床耐药性鲍曼不动杆菌的方法，主要包括：采用2倍工作密度的对数期鲍曼不动杆菌菌液与2倍工作浓度的(S)-blebbistatin 1:1混匀后进行波长为420nm的蓝光光照30-60min。

杀菌效果的鉴定主要为：采用上述所获得的光照后菌液，吸取6-10μL垂直滴于琼脂平板上，将平板倒置培养12h后观察是否有菌落残留，以此鉴定杀菌效率。细菌的残留量可以评估蓝光协同(S)-blebbistatin的杀菌效果。平板具有灵敏的筛选力，若细菌有活力定能在平板上长出，因此可以通过观察细菌菌落的残留量可以评估耐药鲍曼不动杆菌是否杀死。琼脂平板为LB(Luria-Bertani)培养板、MH(Müller-Hinton)培养板、哥伦比亚血琼脂平板。

对数期鲍曼不动杆菌菌液以Nanodrop测量的OD值为0.6-1.0。