[发明专利]β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法

说明书

本发明公开了一种β‑葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，包括以下步骤：将预处理好的大孔树脂置于容器中，向容器中加入PBS缓冲液，平衡后再加入β‑葡萄糖苷酶原溶液，然后将容器置于恒温振荡培养箱中振荡吸附，吸附结束后，将大孔树脂与剩余液体分离，用PBS缓冲液将分离后的大孔树脂冲洗至冲洗液中检测不到蛋白，然后再加入PBS缓冲液和戊二醛试剂进行交联，交联结束后，用PBS缓冲液清洗大孔树脂数次，减压干燥后即得β‑葡萄糖苷酶固定化酶。本发明的有益之处在于：该制备方法不仅工艺简单、成本低廉，而且制备得到的β‑葡萄糖苷酶固定化酶在使用过程中稳定性好、催化效率高、可重复和连续利用。

技术领域

本发明涉及一种固定化酶的制备方法，具体涉及β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，属于生物化学技术领域。

背景技术

β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)又称β-D-葡萄糖苷水解酶，又名纤维二糖酶、龙胆酸酶和杏仁糖酶，其英文名称是β-glucosidase，属于水解酶类。

β-葡萄糖苷酶是一种普遍存在的酶，在苦杏仁汁中最早被发现，这种酶广泛分布于细菌、真菌和植物中，是芳香前体物质水解、结合态糖苷配基释放的有效催化剂，是一类可以催化水解芳香基或烃基与糖基之间糖苷键的酶，其广泛应用于医疗、食品、生物质转化等各个领域，也作为工业食品和生物加工应用的高稳定性和活性催化剂。

β-葡萄糖苷酶虽然具有催化效率高、专一性强、不污染环境等优点，但是其价格昂贵、稳定性差、不易回收，这些问题制约了该酶在工业上的广泛应用。

应用酶的固定化技术，将酶固定于固体载体上，使酶能够进行重复回收利用，由于能够保护酶的催化基团，进而保留酶的催化活性。相对于游离酶，固定化酶具有稳定性好、易与底物和产物分离、催化反应容易控制、可以反复连续使用等优点，可以降低酶催化成本，在工业生产中应用广泛。

发明内容

本发明的目的在于提供一种β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，该制备方法不仅工艺简单、成本低廉，而且制备得到的β-葡萄糖苷酶固定化酶在使用过程中稳定性好、催化效率高、可重复和连续利用。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：将预处理好的大孔树脂置于容器中，向容器中加入PBS缓冲液，平衡后再加入β-葡萄糖苷酶原溶液，然后将容器置于恒温振荡培养箱中振荡吸附；

Step2：吸附结束后，将大孔树脂与剩余液体分离，用PBS缓冲液将分离后的大孔树脂冲洗至冲洗液中检测不到蛋白，然后再加入PBS缓冲液和戊二醛试剂进行交联；

Step3：交联结束后，用PBS缓冲液清洗大孔树脂数次，减压干燥后即得β-葡萄糖苷酶固定化酶，将β-葡萄糖苷酶固定化酶于4℃贮存备用。

前述的β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，在Step1中，前述大孔树脂选用的是带有伯胺基团的弱碱性阴离子交换树脂。

前述的β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，前述带有伯胺基团的弱碱性阴离子交换树脂选用的是D315树脂或D914树脂。

前述的β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，在100mL磷酸盐反应体系中，D315树脂或D914树脂的加入量为0.1-0.4g。

前述的β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，在Step1中，前述恒温振荡培养箱的温度为常温，振荡时间为4-8h。

前述的β-葡萄糖苷酶固定化酶的制备方法，其特征在于，在Step2中，前述大孔树脂与戊二醛的用量比为100-500g：1mL。