[发明专利]一种小麦面筋蛋白活性肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种小麦面筋蛋白活性肽的分离制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将小麦面筋蛋白，与水混合，加入蛋白酶，在恒温下酶解，然后灭酶，冷却至室温后，离心去除沉淀得到小麦面筋蛋白酶解液，所述酶解液经冷冻干燥，得到小麦面筋蛋白酶解物冻干粉；所述水与小麦面筋蛋白的质量比为（8～10）：1；所述蛋白酶为胰酶；步骤（1）所述蛋白酶占小麦面筋蛋白质量的1%～2%；所述酶解温度为45～55℃；酶解时间为20～24 h；

（2）将小麦面筋蛋白酶解液冻干粉溶于水，用凝胶柱进行分离纯化，用去离子水进行洗脱，检测波长为220 nm，收集各洗脱峰并分别测定其在超高浓度乙醇发酵条件下提高酿酒酵母生理活性和发酵性能的能力，选取促发酵效果最好的组分作为目标组分进行下一步分离；

（3）采用反相高效液相色谱对步骤（2）中选定的目标组分进一步分离纯化，收集各洗脱组分，通过UPLC-MS/MS鉴定得到活性组分氨基酸序列为Leu-Leu-Leu或Leu-Met-Leu的活性肽，所述反相高效液相色谱采用以下参数：HPLC，色谱柱BEH130 C18柱；流动相包括A相和B相，A相为0.1%v/v三氟乙酸的水溶液，B相为乙腈；洗脱程序为：0-2 min，5%乙腈；2-35 min，5-40%乙腈；35-36 min，50%乙腈；36-40 min，50-5%乙腈，流速为1.5 mL/min，检测波长为220 nm。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述灭酶时间为10～30 min。

3.根据权利要求1所述的分离制备方法，其特征在于：步骤（1）所述离心是在4000～12000 r/min转速下离心5 min～15 min。

4.根据权利要求1~3任一项所述的分离制备方法，其特征在于：步骤（2）所述洗脱流速为0.5～1.5 mL/min。

5.权利要求1所述的小麦面筋蛋白活性肽在超高浓度乙醇发酵中的应用。