[发明专利]一种表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒株

说明书

本发明提供一种表达鸡传染性法氏囊病病毒变异株的VP2基因重组火鸡疱疹病毒株，是在火鸡疱疹病毒基因组中插入IBDV VP2基因外源制备的。本发明以火鸡疱疹病毒(HVT)FC‑126疫苗毒株为载体，以其UL45‑UL46的间隔区为插入位点，将含有VP2基因的表达盒插入到火鸡疱疹病毒基因组中，获得重组病毒rHVT‑vVP2株。免疫保护评价结果表明本发明的rHVT‑vVP2株免疫鸡群后，针对IBDV强毒株及变异毒株的攻击，可以提供100％攻毒保护。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程疫苗技术领域，具体涉及一种表达鸡 传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒株，该重组病毒免疫家禽 可用于鸡传染性法氏囊病病毒的预防。

背景技术

马立克氏病(Marek’s disease，MD)和鸡传染性法氏囊病(Infectious bursaldisease,IBD)是常见的两种影响家禽生产性能的免疫抑制病。20世纪60年代， 火鸡疱疹病毒(herpesvirus of turkey,HVT)FC-126株曾被作为疫苗用于控制 MD的发生，在全球范围内都得到了广泛应用，大大降低了MD致病所带来 的经济损失。随着MDV毒力的增强，原有疫苗己经不能对其进行有效防控， 新的更加有效的疫苗被不断地研发出来，但HVT疫苗仍得到广泛的使用，特 别是与其他疫苗联合使用，显示出很好的协同效果。而IBD是由鸡传染性法 氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的禽类急性、高度接触 性免疫抑制性传染病，该病主要感染3周龄～12周龄青年鸡，可通过导致鸡法 氏囊损伤、引起免疫抑制和雏鸡死亡等对家禽养殖造成巨大的经济损失。目 前IBDV超强毒株(vvIBDV)和变异株的出现给该病的防控带来巨大难度。

IBD的免疫预防已成为目前防控该病的主要措施，目前商品化的传染性 法氏囊病活疫苗分为弱毒、中等毒力和强毒三类。弱毒活疫苗对有母源抗体 鸡群的免疫保护效果不理想。与弱毒疫苗相比，中等毒力和强毒疫苗的免疫 保护力虽然高很多，但由于其具有一定的致病性，对法氏囊有一定的损伤。 同时，由于受母源抗体干扰及IBDV的特点，导致传统疫苗在实际应用中形 成不可避免的免疫空白期。因此，针对传染性法氏囊病新型疫苗研发重组活 载体疫苗研究就成为目前的热点之一。

影响外源基因表达水平的因素有很多，例如启动子的选择、密码子的偏 嗜性、表达抗原的类型以及调控元件的作用等。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达IBDV田间分离株的VP2基因重组火鸡疱 疹病毒株，该病毒株可用于家禽中诱导针对IBDV的保护性免疫应答。

本发明首先提供一种在火鸡疱疹病毒(HVT)基因组中插入外源基因的 方法，是将外源基因插入火鸡疱疹病毒基因组的UL45区和UL46区的间隔区。

更具体的，所述的插入位点位于HVT基因组UL45-UL46间隔区的 95332nt-95342nt之间。

本发明再一方面提供一种重组火鸡疱疹病毒，是通过在火鸡疱疹病毒的 UL45-UL46间隔区插入表达IBDV VP2基因的表达盒所构建；

所述的VP2基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1；其编码的氨基酸序列 为SEQ IDNO:2。

所述的表达IBDV田间分离株VP2基因的表达盒，依次包括mcmv启动 子(鼠疱疹病毒Ⅰ型立即早期启动子)、VP2基因、单纯疱疹病毒TK基因聚 腺苷酸化终止信号TK polyA；其中由mcmv负责VP2基因的起始转录， TkployA终止子为VP2基因mRNA转录提供终止信号，同时mRNA 3’端添加 polyA尾巴。

所述的表达IBDV田间分离株VP2基因的表达盒，其一种具体的核苷酸 序列为SEQID NO:3。