[发明专利]具有降低低密度脂蛋白的PCSK9特异性全人源抗体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术技术领域，公开了能降低低密度脂蛋白(LDL)的PCSK9特异性全人源抗体及其应用，所述抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。通过体外细胞学试验和模型小鼠体内试验，初步证实了本发明提供的全人源抗体能够调节细胞表面低密度脂蛋白受体(LDLR)的数量、调节细胞对LDL的摄取，调节模型小鼠血液中低密度脂蛋白胆固醇(LDL‑C)的浓度水平，由此可见，本发明为制备靶向PCSK9的降胆固醇制剂奠定了核心原料基础。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，具体涉及人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type 9，PCSK9)特异性的全人源抗体，编码该抗体的基因、插入有该基因的载体、转染有该基因的宿主细胞，以及它们在制备用于预防和/或治疗低密度脂蛋白升高相关病症的制剂中的应用，和一种制剂。

技术背景

心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是当今世界上危害人类健康最为严重的疾病之一，业内普遍认为，血液中的低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)水平升高会导致动脉粥样硬化，是心血管疾病主要的罪魁祸首。

降低血液中LDL是防治CVD的基本策略。他汀类药物是3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)的抑制剂，抑制内源性胆固醇的合成，是治疗CVD的首选降脂药物。然而部分患者，尤其是家族性高胆固醇(FH)患者的血清LDL水平(临床上常用LDL中的胆固醇LDL-C的浓度表示)，尽管注射他汀类药物，仍旧难以恢复到正常水平，甚至一些患者还出现了他汀类药物耐受反应。因此，迫切需要开发降低胆固醇的新型替代药物。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin kexin type9，PCSK9)是一种分泌性丝氨酸蛋白酶，被认为是LDL代谢的重要调节因子，是FH和CVD的潜在治疗靶点。PCSK9是前蛋白转化酶家族的一员，主要表达于肝、肠、肾和中枢神经系统。PCSK9由前体结构域、催化结构域和C端结构域组成，其中后者富含半胱氨酸和组氨酸。转录后，PCSK9 mRNA进入内质网并翻译表达一个分子量为74kD的前蛋白。前蛋白在高尔基体中裂解为分子量为20kD原结构域和63kD成熟结构域。前体结构域与催化结构域非共价连接，抑制PCSK9的自催化作用。

PCSK9通过下调肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDL receptor，LDL-R)，对LDL-C的降解和脂质代谢的调节起着重要作用。PCSK9的催化结构域与LDL-R的表皮生长因子A结构域结合形成配体-受体复合物。复合物被包裹进入细胞质并转移到溶酶体中，在溶酶体中LDL-R被降解。结果，血液中的LDL清除率降低，血液LDL-C水平升高。

目前已经研发出多种形式的PCSK9抑制剂，如siRNA、抑制性短肽或小分子化合物。这些抑制剂都不同程度地存在靶向性低的缺点。部分机构研制了PCSK9抗体抑制剂，这些抗体具有特异性高、副作用小等优点。随着杂交瘤技术的建立与完善，小鼠单克隆抗体已广泛应用于疾病的诊断。然而，如果长期应用于人体，小鼠单克隆抗体将被人体免疫系统识别，产生人抗-小鼠抗体(HAMA)，降低治疗效果。因此，制备人源化抗体在抗体药物研发中至关重要。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种具有降低低密度脂蛋白的PCSK9特异性全人源抗体及其应用。