[发明专利]一种细叶百合基因LpNAC6的克隆及其应用

说明书

本发明公开了细叶百合LpNAC6基因，是以细叶百合鳞茎的RNA反转录的cDNA为模板进行编码区序列的扩增，获得序列为909bp的基因，命名为LpNAC6；利用细叶百合LpNAC6基因构建过表达载体转化烟草叶片，经试验表明，LpNAC6基因可以明显提高转基因烟草抵抗盐胁迫的能力，为细叶百合在百合育种的进一步应用奠定基础，同时也在培育抵抗高盐胁迫环境的转基因观赏植物方面具有广阔的前景。

技术领域

本发明涉及基因技术领域，特别的涉及一种细叶百合基因LpNAC6基因及其应用。

背景技术

NAC转录因子家族在植物的生长发育中扮演着重要角色，包括顶端分生组织的形成及器官边界的建立、激素调控和信号转导、植株的衰老、次生壁的形成、矿质元素营养和营养物质的转运。不少研究已经证实NAC转录因子在植物发育和生长调节以及逆境应答分子网络中扮演着极其重要的角色，随着更多的NAC转录因子被发现及被证明参与植物非生物胁迫应答，将有助于更深入的揭示植物非生物应答的分子机制，也有助于培育更多具有较强抗性的新品种。

细叶百合(Lilium pumilum DC.)是百合属中分布最广、纬度偏北的一种多年生草本植物，适应范围广，极耐寒，且耐干旱和盐碱，是百合抗性育种的重要亲本。细叶百合在食用和药用方面都有一定的应用价值，近年来因其花独特、花色艳丽且品种繁多，在园林应用方面的应用价值逐渐被人们所关注。

本研究将从抗寒、耐盐植物细叶百合中克隆得到NAC基因并构建到植物表达载体上，采用农杆菌介导法将LpNAC6基因导入烟草基因组中，进行功能验证。本研究将为利用分子技术培育植物新品种奠定基础，为百合的抗逆基因工程提供参考。

发明内容

本发明的目的是为提高植物耐盐性，而提供细叶百合LpNAC6基因。

细叶百合LpNAC6基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

所述的细叶百合LpNAC6基因，它是细叶百合鳞茎总RNA反转录成cDNA，以cDNA为模板，用引物：

LpNAC6-F:5’―ATCACAGCAACAGCGGTCAT―3’；

LpNAC6-R：5’―ATGACCTGTGTGCACCATCT―3’。

进行PCR扩增获得。

一种表达载体，它是在植物表达载体中插入了序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

所述表达载体为pBI121-GFP。

所述的细叶百合LpNAC6基因在提高转基因植物耐盐性的应用；

所述的植物为烟草。

本发明提供了细叶百合LpNAC6基因，是以细叶百合鳞茎总RNA反转录成cDNA为模板进行编码区序列的扩增，获得序列为909bp的基因，命名为LpNAC6；利用细叶百合LpNAC6基因构建载体转化烟草叶片，经试验表明，LpNAC6基因可以提高转基因烟草的抗盐性，在培育耐盐转基因植物方面有广阔的前景。

附图说明

图1细叶百合鳞茎RNA提取电泳结果图；

图2细叶百合LpNAC6基因编码区序列验证电泳图；A：PCR结果；B：菌液PCR；

图3LpNAC6与其他物种NAC氨基酸序列的同源性比对；

图4LpNAC6系统进化树分析；

图5细叶百合LpNAC6基因pMD18-T-LpNAC6中间载体验证电泳图；

图6pBI121-GFP空载体和pMD18-T-LpNAC6经KpnⅠ和SalⅠ双酶切后的片段验证电泳图；