[发明专利]基于高阶G4和乙酰基抗体的电化学传感器制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于高阶G4和乙酰基抗体检测乙酰转移酶活性的电化学传感器制备方法，具体步骤如下：

(1)金电极预处理：将金电极在麂皮上用0.05μm的三氧化二铝粉末抛光0.5～5min，抛光后将电极用二次蒸馏水于超声清洗器中超声清洗0.5～5min，然后用洗耳球吹去金电极表面水珠，用滤纸擦干电极外部，备用；

(2)电极1：用20～2000μM，2～12μL的底物多肽溶液涂覆金电极并在4℃下保持过夜，所述底物多肽的序列为CRGKGGKGLKGGAKA，然后用pH 7.0，100mM的磷酸缓冲溶液洗涤，之后将电极浸入0.05～2mM 1-己硫醇MCH溶液中20～70min，然后用磷酸缓冲溶液冲洗表面；将底物多肽修饰的电极置于20～2000μL的HAT p300反应混合物中并在25～42℃下孵育20～150min，HAT p300反应混合物包括不同浓度的p300，100～5000μM的Ac-CoA和磷酸缓冲溶液，孵育后，用磷酸缓冲溶液洗涤电极以除去过量的试剂，并在氮气流中干燥，得到电极1；

(3)电极2：在含10～80mM N-羟基琥珀酰亚胺和50～100mM 11-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的100μL磷酸缓冲溶液中，用移液枪加入0.05～1μM，2～12μL的DNA探针和1×10^-4～1×10^-2mg/mL，2～12μL的乙酰化抗体Ab_Ac，并在25～42℃下孵育0.5～1.6h，得乙酰化抗体-DNA探针复合物，取2～12μL该复合物滴到电极1表面，孵育0.1～1h，得到电极2；

(4)电极3：在电极2置于TdT反应混合液中，TdT反应混合液包括0.5～3μL的二次蒸馏水、1～30mM 0.1～6μL的dATP、1～30mM 0.1～6μL的dGTP、1～100U/mL 0.1～5μL的TdT、0.5～5μL的5×TdT缓冲溶液，在28～40℃下孵育0.4～1.7h，用磷酸缓冲溶液缓缓冲洗，然后在该电极上滴加0.05～2mM，1～7μL的KCl溶液，常温下孵育20～90min，之后滴加G4链混合液，所述G4链混合液包括0.05～0.5M 1～5μL的MgCl₂、0.5～10μM，1～10μL的G4，常温下放置0.6～1.2h，然后滴加0.05～0.8mM，1～10μL的hemin，常温下放置15～45min，使G4与hemin充分作用形成具有辣根过氧化物酶活性的G4-hemin复合物。

2.一种根据权利要求1所述的制备方法所制备的电化学传感器的应用，其特征在于：用于检测乙酰转移酶活性，检测到检测限为1pM的低浓度的乙酰转移酶HAT p300。

3.根据权利要求2所述的应用，用于HAT p300抑制剂的筛选检测，筛选出对乙酰转移酶有效抑制剂：漆树酸和C646。