[发明专利]一种污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法

权利要求书

1.一种污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的分离纯化方法具体包括以下步骤：

(1)厌氧氨氧化红菌富集培养基的制备

将富集培养基溶于蒸馏水中，调节pH7.5～8，分装到医用注射瓶中，每瓶分装7ml，压帽；置于沸水中30-50min，灭菌；

(2)厌氧氨氧化红菌分离培养基的制备

将分离培养基溶于蒸馏水中，调节pH7.5～8，加热溶解，分装到医用注射瓶中，每瓶分装7ml，压帽；置于沸水中30-40min，灭菌；

(3)厌氧氨氧化红菌的富集培养

取污水处理厂红色污泥注入上述制备好的富集培养基中，25℃～55℃恒温培养至培养液变红为止，得到富集培养物；

(4)厌氧氨氧化红菌的分离培养

取0.77ml上述富集培养物用制备好的富集培养基按照10倍系列稀释法稀释至10^-4，将10^-3和10^-4梯度的稀释液用1ml无菌注射器取0.1ml，分别缓慢注入至上述50℃～55℃未凝固的分离培养基中，缓慢滚动混合均匀，垂直静置放置0.5h～1h得到透明的半固体培养基，然后置于恒温培养箱中培养，培养温度为25℃～55℃，培养至培养基中出现红点为止，得到分离培养物；

(5)厌氧氨氧化红菌的纯化培养

用1ml无菌注射器抽取0.2ml富集培养基，接着用该注射器吸入分离培养物中轮廓清晰的红点，然后注入富集培养基中，放置在恒温培养箱中培养，培养温度25℃～55℃，培养3d～7d直到培养液变红，得到纯化培养物。

2.根据权利要求1所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的富集培养基配方为碳酸氢钠质量浓度0.2％～0.3％、蛋白胨质量浓度0.2％～0.3％、氯化铵质量浓度0.1％～0.2％、亚硝酸钠质量浓度0.1％～0.2％、氯化钙质量浓度0.1％～0.2％、氯化镁质量浓度0.05％～0.1％、微量元素溶液体积浓度1％～2％。

3.根据权利要求2所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的微量元素溶液为硫酸锌0.2g，硫酸亚铁0.5g，硫酸锰0.06g，维生素C 1g，维生素B₁₂ 1g，蒸馏水1000mL。

4.根据权利要求1所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的分离培养基配方为碳酸氢钠质量浓度0.2％～0.3％、氯化铵质量浓度0.1％～0.2％、亚硝酸钠质量浓度0.1％～0.2％、氯化钙质量浓度0.1％～0.2％、氯化镁质量浓度0.05％～0.1％、琼脂粉质量浓度0.6％～1％。

5.根据权利要求1所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的红色污泥与富集培养基的质量比为1∶20-30。

6.根据权利要求1所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的红色污泥其现场采集后进行密封处理在4℃下保藏不超过7d。

7.根据权利要求1所述的污水中厌氧氨氧化红菌分离纯化方法，其特征在于，所述的医用注射瓶体积为7～18ml，装液体积为90％～95％。