[发明专利]一种血清外泌体ssc-miR-17-5p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种血清外泌体ssc‑miR‑17‑5p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用。所述的血清外泌体ssc‑miR‑17‑5p的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。使用该分子标记来检测妊娠状态具有早期、方便、快捷、特异和灵敏的特点，从而缩短假孕母猪的空怀期，及早采取复配，有利于生产管理，提高生产效率。本发明还提供了一种检测上述分子标志物的引物和试剂盒，为母猪早期妊娠诊断提供了新的途径。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种血清外泌体ssc-miR-17-5p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用。

背景技术

母猪繁殖性能是养猪业生产效率的重要指标，繁殖性能的指标之一就是母猪年生产力(PSY)，其反映了猪场养猪技术水平和生产效率的核心指标，据统计我国母猪PSY不足20头，其生产性能偏低的状况严重制约着我国养猪业的发展。为了提高母猪的生产力，则须保证其正常的繁殖周期。早期的妊娠诊断可以确认配种后的母猪是否受孕，对于已经受孕的母猪要及时进行保胎，对于未孕母猪及时采取复配措施，缩短其空怀期，对于屡配不孕的母猪及早进行淘汰。B超诊断是目前猪场最普及的妊娠诊断方法，但B超诊断需要在母猪妊娠30天左右开展才能达到较高的准确性。为了在妊娠早期准确判定母猪妊娠状况，我们利用外泌体及其携带的MicroRNA作为妊娠标志物以期快速准确的检测其妊娠状况。

外泌体(exosome)是直径30～150nm的磷脂双分子层囊泡，并由各种细胞分泌至细胞外。外泌体内可选择性包含各类核酸分子，如DNA、mRNA、microRNA、circRNA、lncRNA等以及各种脂质和蛋白质。外泌体因其表面含有特殊的蛋白分子(CD9、CD63、CD81、CD82等)可被鉴定出。外泌体及其携带物可作为信号分子通过体液传导给其他细胞组织从而行使其功能。在其他物种中有研究表明血液miRNA可以作为妊娠的生物标志物。miRNA是内源的，短的17-25nt非编码RNA，通过与mRNA互补结合来破坏和降解转录或抑制翻译。miRNA表达具有高度组织特异性，其表达水平随发育、生理或病理阶段而发生明显变化。

已有相关文献研究介绍外泌体及其携带物在其他物种的不同体液中作为疾病或生理标记的载体的研究。我们假设外泌体也存在于猪血清中，它们的分布会随着妊娠状态而变化，本发明是发现并确定在妊娠时期相对空怀期/发情期表达差异显著的外泌体miRNAs，确定其应用于早期妊娠诊断的分子标志物的可能。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种血清外泌体ssc-miR-17-5p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用。

本发明的另一目的在于提供一种用于检测上述母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物。

本发明的再一目的在于提供一种包含上述引物的试剂盒。

本发明的第四个目的在于提供上述引物和试剂盒的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种血清外泌体ssc-miR-17-5p作为母猪早期妊娠诊断分子标志物的应用，所述的血清外泌体ssc-miR-17-5p的核苷酸序列如下所示：

5’-CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG-3’；

一种用于检测上述母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物，包含引物ssc-miR-17-5p-F和ssc-miR-17-5p-R，其核苷酸序列如下所示：

引物ssc-miR-17-5p-F：5’-GCCAAAGTGCTTACAGTGC-3’；

引物ssc-miR-17-5p-R：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’；

所述的用于检测母猪早期妊娠诊断分子标志物的引物，优选还包含茎环法反转录引物ssc-miR-17-5p_1，其核苷酸序列如下所示：