[发明专利]一种迷你联合佐剂纳米颗粒及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种以两亲性单体分子为基元通过自组装制备而成的联合佐剂纳米颗粒，所述两亲性单体分子为疏水性佐剂分子和亲水性佐剂分子反应得到。该联合佐剂纳米颗粒的刺激作用相对于游离状态下联合应用亲水性佐剂和疏水性佐剂产生的作用更强。而且，联合佐剂纳米颗粒还可作为纳米载体递送抗原至抗原提呈细胞，促进抗原提呈细胞对抗原的摄取，实现抗原与佐剂的共递送，产生协同性免疫应答，能够大大增强抗肿瘤、结核等疫苗的免疫疗效。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种自组装制备而成的联合佐剂纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

佐剂是先于抗原或同时注射于动物体内，能非特异性改变机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质。佐剂的主要作用是递呈抗原和增强免疫系统的刺激。免疫增强剂直接(如细胞因子)或通过模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR) (如细菌组分)激活固有免疫，而递送系统浓缩抗原并展示抗原，将疫苗抗原靶向抗原呈递细胞，帮助抗原和免疫增强剂共定位。目前，我国常用的佐剂有铝盐、油乳、蜂胶、多糖、微生物氟氏(FA)佐剂、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(Interleuki-ns,ILs)、免疫刺激复合物(ISCOMs)、糖苷及复方中药佐剂等，新型免疫佐剂有核酸、CpG、补体、纳米、脂质体(LIP)等。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种联合佐剂纳米颗粒。

在一个方面，本发明提供了一种联合佐剂纳米颗粒，所述联合佐剂纳米颗粒为两亲性单体分子通过自组装制备而成，所述两亲性单体分子为疏水性佐剂分子和亲水性佐剂分子反应得到。

在一些实施方案中，所述联合佐剂纳米颗粒的直径为100-200nm。

在一些实施方案中，所述疏水性佐剂分子为单磷脂酰脂质A或其类似物。

在一些实施方案中，所述亲水性佐剂分子为寡聚核苷酸或寡聚脱氧核苷酸。优选地，所述亲水性佐剂分子为CPG-ODN。

在另一个方面，本发明提供了一种联合佐剂纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：

S1：将单磷脂酰脂质A或其类似物进行叠氮化基团修饰，透析、冻干；

S2：将S1所得物质与寡聚脱氧核苷酸混合，室温下搅拌12-18h，然后透析、冻干，得到所述联合佐剂纳米颗粒。

在一些实施方案中，加入叠氮磷酸二苯酯和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳 -7-烯进行叠氮化基团修饰，20℃搅拌反应24～48h后透析、冻干；所述单磷脂酰脂质A的质量与叠氮磷酸二苯酯的体积、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯的体积的比值(2.0～4.0)mg:(3.0～6.0)μl：(2.0～4.0)μl。

在一些实施方案中，步骤S2中，S1所得物质的质量与寡聚脱氧核苷酸的体积比为(1.0～2.0)mg:(100～200)μl。

具体地，采用透析袋进行透析，透析时收集分子量较大的物质。

在一些实施方案中，所述带负载物选自药物、抗原。优选为鸡卵清蛋白。当然也可以为其他抗原或药物

在又一个方面，本发明提供了上述联合佐剂纳米颗粒在制备负载药物、抗原的复合物中的应用。

在又一个方面，本发明提供了一种免疫原性组合物，其含有有效量抗原和上述的联合佐剂纳米颗粒。

在一些实施方案中，将S2得到的物质与待负载物混合，室温下搅拌反应 8-10h，得到免疫原性组合物纳米颗粒。所述待负载物可以为鸡卵清蛋白或其它抗原或药物。当所述待负载物为鸡卵清蛋白时，所述S2得到的物质与所述待负载物的质量比为1:1-2。