[发明专利]一株分泌抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5A4及单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了一株分泌抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5A4及单克隆抗体和应用。所述杂交瘤细胞株5A4于2019年10月3日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：C2019219。所述杂交瘤细胞株5A4分泌的抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体mAb 5A4能够特异地识别柑橘黄龙病菌膜蛋白Cmp1，通过免疫印迹反应证明单克隆抗体mAb 5A4可以特异地识别感病植物叶片组织中的病原菌CLas的膜蛋白Cmp1。该单克隆抗体mAb 5A4可用于制备检测柑橘黄龙病的制剂、试剂盒或试纸条，从而快速便捷地实现田间检测柑橘黄龙病，具有很好的推广应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞免疫技术领域，具体地，涉及一株分泌抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5A4及单克隆抗体和应用。

背景技术

柑桔黄龙病是一种毁灭性的柑桔病害，在全世界范围内造成巨大的经济损失。柑桔植株感染黄龙病之后，叶片萎缩掉落，结实率下降，果实偏小，颜色黄绿不均，最终导致植株死亡，且柑桔黄龙病传播性极强，短期内可蔓延整个果园。柑桔黄龙病的病原菌是革兰氏阴性细菌，其具有三种致病变种，分别为亚洲种Candidatus Liberibacter asiaticus(CLas)、非洲种Candidatus Liberibacter africanus(CLaf)、美洲种CandidatusLiberibacter americanus (Clam)。目前针对柑桔黄龙病尚无有效的治疗措施和理想的抗性品种，因此开发高效的黄龙病检测方法，辨别黄龙病、及早预测黄龙病的发生是当前防治黄龙病的主要方向。

目前田间辨别柑桔黄龙病的方法主要是通过观察病害症状，但因为黄龙病病状复杂，难以与其他柑桔病害区分，容易受到环境影响而误诊。实验室诊断黄龙病的方法主要有电镜法、酶法诊断、ELISA、常规PCR、巢氏PCR、qPCR和LAMP等，尽管上述方法可以较为准确地检测黄龙病，但是由于检测设备和技术的门槛、成本较高，上述方法难以广泛地应用在实际田间柑桔黄龙病的检测中。

单克隆抗体在植物病原菌中的应用起步较早，其试材的同质性和均一特异性的优点，为植物病原细菌学中细菌种、小种或系统特异抗体的制作开辟了道路，不仅替代了病害诊断和细菌检出中的多克隆抗体，而且有希望应用于细菌的分类及生理生化研究中。因此，研发能特异性识别黄龙病病原菌的单克隆抗体，可用于开发检测灵敏度高、携带方便的黄龙病检测试纸，有利于控制黄龙病的发生和蔓延。目前有相关专利CN201810132721.6、CN201810132890.X分别报道过针对CLas McAb2、McAb1膜表面蛋白，设计了杂交瘤细胞株并得到其单克隆抗体。但柑橘黄龙病菌的外膜蛋白有很多种，以哪种外膜蛋白作为抗原制作单克隆抗体检测柑橘黄龙病菌的效果最好未见报道，且目前还尚未有针对柑橘黄龙病病菌亚洲种(CLas)膜蛋白Cmp1(WP_015452405.1)的单克隆抗体方面的研究报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一株分泌抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5A4。

本发明的另一发明目的在于提供上述杂交瘤细胞株5A4分泌的抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体mAb 5A4。

本发明的另一发明目的在于提供上述抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体mAb 5A4在制备检测柑橘黄龙病菌CLas的制剂中的应用。

本发明的另一发明目的在于提供上述抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体mAb 5A4在制备快速检测柑橘黄龙病菌CLas的装置中的应用。

本发明的另一发明目的在于提供上述抗CLas膜蛋白Cmp1单克隆抗体mAb 5A4在制备田间快速检测柑橘黄龙病菌CLas的试纸条和/或试剂盒中的应用。

本发明的另一发明目的在于提供一种检测柑橘黄龙病的药物和/或制剂。

本发明的另一发明目的在于提供一种柑橘黄龙病的ELISA检测试剂盒。