[发明专利]一种用于乳腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开一种用于乳腺癌早期筛查和诊断的血清蛋白标志物，属于生物医学技术领域，血清蛋白标志物为CEBPA、RalA、p62、PTCH1、BRCA2、HRAS、FUBP1、GATA3、FGFR3、ALK、HISTIH3B或p53基因编码的蛋白中的任意一种或两种以上的联合。同时公开包括上述血清蛋白标志物的试剂盒和检测方法。本发明基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的人类蛋白质芯片，共包含180个人源重组蛋白质，先通过蛋白质芯片初步筛选出乳腺癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA间接法实验进行验证，最终筛选出可用于乳腺癌早期筛查和诊断的一组乳腺癌的血清蛋白标志物，其联合诊断乳腺癌ROC曲线下面积达0.886，95％CI为0.847～0.925，保证特异度92.2％时，灵敏度为67.9％，一致率达到80.1％。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域。

背景技术

乳腺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，在大多数亚洲国家中包括中国，位于女性癌症死亡率的首位，其发病率约占全身其它各类恶性肿瘤的11.6％，而中国乳腺癌的发病率增长明显高于西方国家，严重威胁着人们的生命健康。乳腺癌起病隐匿，大多数患者在初次诊断时，便已进入乳腺癌晚期，因而失去了治疗的机会。其中最主要的原因是乳腺癌早期大多是无痛肿物，不易引起重视且早期不具备典型症状体征，或者是肿物较小影像学检查较难察觉。目前，最新的恶性肿瘤早期检测方法有多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C12芯片)、肿瘤基因突变检测试剂盒、六项肿瘤标志物测定试剂盒、人恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒。但是，多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C12芯片)的检测假阳性较高，且没有具有针对性的乳腺癌检测标志物，检测效率低；肿瘤基因突变检测试剂依靠聚合酶链式反应(PCR)这样繁复的操作，且容易产生假阳性；六项肿瘤标志物测定试剂盒和人恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒，只能测出患者有肿瘤，但不能判断肿瘤的具体类型。

近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。这一概念的提出对乳腺癌早期诊断研究指引了一个新的方向。其中肿瘤相关抗原p62能够激发人体产生免疫反应，产生自身抗体，具有重要意义的是抗p62自身抗体在肝癌患者循环系统出现的时间：使用从慢性肝炎发展到肝硬化再到肝癌的序列血清，发现抗p62自身抗体在患者的慢性肝炎阶段没有出现，在肝硬化的前期、中期也没有出现，而在肝硬化阶段的晚期肝癌发生前的一段时间含量急剧升高，而此时尚未出现肝癌的临床症状和体征，临床上尚不能发现肝癌，并且这一现象在多个肝癌患者的序列血清中得到重复。这就说明，抗p62自身抗体是一个有潜力的能够早期诊断肝癌的血清学标志物。随后对小样本的肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者和正常人的血清检测抗p62自身抗体进行检测，结果显示这种自身抗体的特异度很高，但是灵敏度尚不能达到20％。显然，如果单独以抗p62自身抗体作为诊断肝癌的标志物，诊断价值较低。在2003年的一项使用7种抗TAA自身抗体检测肝癌的研究中，单个指标的灵敏度不超过20％，但是通过并联这7种TAA自身抗体，检测的灵敏度可以达到56.9％，而诊断的特异度仍然很高。说明联合多个TAA自身抗体具有较高的诊断价值，是一种有应用潜力的策略。上述研究为乳腺癌早期诊断提供了思路，所以寻找一组具有较高诊断价值的TAA自身抗体组合用于乳腺癌早期筛查和诊断也是有应用潜力的。