[发明专利]一种胎盘保存液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种胎盘保存液，用来保存采集后到分离前的胎盘组织样本，主要成分为高糖DMEM干粉培养基、碳酸氢钠、胰岛素、青霉素、链霉素、两性霉素、肝素钠注射液、雷帕霉素、曲美替尼、芍药苷。本发明胎盘保存液配比简单，成本低廉、使用方便，可以保持胎盘组织样本内干细胞的活性，在0～8℃的情况下有效保存至少120小时，分离出的干细胞活性受时间的影响很小，大大减少了组织样本从采集到制备的时间限制，并能有效降低污染概率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种保存胎盘组织样本的保存液。

背景技术

胎盘干细胞具有广阔的临床应用前景，从开始就受到国际上无数专家的关注。胎盘干细胞指的是存在于胎盘组织中的干细胞，包括造血干细胞、间充质干细胞等多种干细胞。胎盘造血干细胞移植可治疗恶性血液病，且胎盘中造血干细胞数量丰富，是脐带血的5～10倍，突破了脐带血来源造血干细胞30kg体重使用的瓶颈，可以提供自体干细胞足够的数量重建成年人的造血系统。胎盘间充质干细胞相比其他来源干细胞，还具有以下优势：1）具有低免疫原性以及免疫抑制作用；2）具有强大的免疫调节作用，可以调节患者的免疫状态；3）具有向特定细胞定向分化的特性；4）胎盘本身属于医疗废弃物，采集非常方便，且采集胎盘对新生儿无任何伤害，无伦理问题；5）胎盘中间充质干细胞数量非常丰富，活性强；6）无致瘤性风险。目前，胎盘干细胞治疗相关的疾病包括重型再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病等血液系统疾病，以及糖尿病、特发性肺纤维化、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎等非血液系统疾病。

胎盘干细胞制备过程包括胎盘组织样本的采集、运输、交接、检测、分离、冻存、复苏、原代培养和传代培养等诸多步骤，在胎盘样本采集后到分离前需要运输、交接和检测三个步骤，实际操作中需要存放较长的时间。胎盘组织样本一旦采集，脱离了原有的体内环境，其中的干细胞活性会受很多的因素的影响，诸如时间、温度、渗透压、营养等。目前胎盘组织样本很多情况需要异地采集，运输、交接和检测三个步骤所用的时间就更长，胎盘组织样本需存放的时间较长，影响因素就更加的复杂。

国内的胎盘组织样本保存多采用直接装无菌容器或者补加基础培养基的方法。直接装无菌容器无保存液的胎盘组织样本的保存时间一般少于24小时，给胎盘组织样本的运输、交接和检测带来了不小的时间压力，迫切需要改进其保存方法。因此，开发简单、快速、高新、安全获得大量胎盘干细胞方法成为当务之急，而目前现有技术中还未有用于制备胎盘干细胞的试剂盒，使得相关科研工作进展缓慢。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中保存时间短、干细胞得率和活性受影响的问题，提供了一种胎盘保存液，该胎盘保存液配比简单，成本低廉，使用方便。利用本发明胎盘保存液可以保存胎盘组织样本内干细胞的活性，在0~8℃的情况下有效保存至少120小时，分离出的干细胞活性受时间的影响很小，大大减少了组织样本从采集到制备的时间限制，并能有效降低污染概率。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种胎盘保存液，其特征在于，在1L胎盘保存液中含有：高糖DMEM干粉培养基13.4g、碳酸氢钠2.438g、胰岛素2～10mg、青霉素100～200mg、链霉素100～200mg、两性霉素2.5～5mg、肝素钠注射液0.5～1.5g、雷帕霉素10~50mg、曲美替尼0.3~0.6mg、芍药苷2~5mg，余量为注射用水。

所述的一种胎盘保存液的制备方法，包括以下步骤：

(a) 将高糖DMEM干粉培养基13.4g倒入一容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下，并入容器；加注射用水至950ml，轻微搅拌溶解；

(b) 加入2.438 g碳酸氢钠；

(c)轻微搅拌溶解，加注射用水至1L；

(d)用1mol/L氢氧化钠溶液或者1mol/L盐酸溶液调节PH值至中性；