[发明专利]光触发红细胞膜包裹NO纳米仿生供体材料的制备及应用

权利要求书

1.一种光触发红细胞膜包裹NO纳米仿生供体材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)合成巯基化的介孔二氧化硅包裹的聚多巴胺纳米粒子

室温条件下将聚多巴胺纳米粒子分散在水和有机溶剂混合溶液中，然后加入十六烷基三甲基溴化铵，30～50℃条件下搅拌30～60min，然后加入氨水与四乙氧基硅烷混合溶液，继续反应24～48h；反应结束后加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液，60～80℃继续反应6～12h，收集纳米粒子并分散在NH₄NO₃的乙醇溶液中，50～80℃反应6～12h，去除十六烷基三甲基溴化铵，得巯基化的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子；

(2)双负载聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子制备

室温条件下，将步骤(1)所得巯基化的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子和亚硝酸叔丁酯分散在混合溶剂中，氮气保护下避光持续搅拌24～48h，得到负载NO的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子；

室温条件下将负载NO的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子分散有机溶剂中，然后加入盐酸阿霉素，避光持续搅拌12～24h后，得到双负载NO和DOX的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子；

(3)靶向标记红细胞膜制备

将从小鼠体内取出的新鲜全血离心除去血浆，用无菌PBS洗涤数次，然后重悬于无菌PBS中一段时间后，收集粉红色红细胞；将收集到的红细胞超声处理后使用微型挤出机通过聚碳酸酯多孔膜，最终得到红细胞膜囊泡；

室温条件下，将磷脂聚乙二醇马来酰亚胺溶于缓冲液中，然后将标记物cRGD和磷酸三(2-氯乙基)酯加入后持续搅拌4～6h后，透析，冷冻干燥最终得红细胞膜标记物cRGD-PEG-DSPE；

将所得红细胞膜囊泡稀释一倍，然后取红细胞膜标记物cRGD-PEG-DSPE加入到该稀释液中并在4℃条件下搅拌4～6h后，离心后超声处理，然后使用微型挤出机将此囊泡依次通过400nm和200nm的聚碳酸酯多孔膜，最终得到cRGD标记的红细胞膜囊泡；

(4)靶向分子标记的红细胞膜包裹双负载聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子的制备

将步骤(2)得到的双负载NO和DOX的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子配制成分散液，室温条件下使用微型挤出机通过聚碳酸酯多孔膜将双负载NO和DOX的聚多巴胺@介孔二氧化硅纳米粒子分散液和步骤(3)得到的cRGD标记的红细胞膜囊泡进行反复混合挤压数次，最终得到R-RBC@PDA@mSiO₂/SNO@DOX纳米粒子即所述光触发红细胞膜包裹NO纳米仿生供体材料。

2.根据权利要求1所述的一种光触发红细胞膜包裹NO纳米仿生供体材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：

所述聚多巴胺纳米粒子通过以下步骤制备：室温条件下将三(羟甲基)氨基甲烷加入去离子水中配制成Tris-HCl缓冲液，然后加入异丙醇，调整混合溶液pH值为8.0～9.0，在搅拌状态下加入多巴胺盐酸盐；持续搅拌2～4天后，制得聚多巴胺纳米粒子；其中，所述Tris-HCl缓冲液与多巴胺盐酸盐摩尔比为1:0.1～0.5；所述Tris-HCl缓冲液与异丙醇体积比为1:0.2～0.5，去离子水以每10mL加入10～15mg三(羟甲基)氨基甲烷计；

所述十六烷基三甲基溴化铵与3-氨基丙基三乙氧基硅烷摩尔比为1:0.2～0.5；所述聚多巴胺纳米粒子与十六烷基三甲基溴化铵质量比为1:10～20；所述四乙氧基硅烷使用量以每1mL加入1～2g的十六烷基三甲基溴化铵计；所述氨水与四乙氧基硅烷体积比为1：0.1～0.3；所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷的乙醇溶液中乙醇以每10mL加入10～20mg 3-氨基丙基三乙氧基硅烷；所述NH₄NO₃的乙醇溶液的浓度为5～10mg/mL；

所述有机溶剂包括乙醇、甲醇、二氯甲烷、三氯甲烷中的至少一种，所述水和有机溶剂混合溶液中水和有机溶剂体积比为1:0.2～0.5。