[发明专利]一种黄山木兰根系总RNA的提取方法

权利要求书

1.一种黄山木兰根系总RNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：

1)、在液氮中将黄山木兰新鲜侧根研磨成粉末，再将获得的黄山木兰根系粉末与抽提溶剂混合，孵育，得到孵育混合液；

2)、向步骤1)获得的孵育混合液中加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提离心，得到抽提上清液；

3)、将步骤2)获得的抽提上清液与氯化锂溶液混合，静置过夜，离心处理，得到总RNA沉淀；

4)、向步骤3)获得的总RNA沉淀中加入乙醇溶液，漂洗离心，得到沉淀物；

5)、将步骤4)得到的沉淀物溶解于SSTE缓冲液中，然后与氯仿-异戊醇混合液混合，抽提离心，得离心上清液；

6)、将步骤5)获得的离心上清液与无水乙醇混合，静置，离心，得到沉淀物；

7)、将步骤6)获得的沉淀物与乙醇溶液混合，漂洗离心，得到沉淀物，所得沉淀物再加入无水乙醇，漂洗离心，得到沉淀物；即为黄山木兰根系总RNA。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，所混合是指涡旋混合，涡旋混合时间不小于30s。

3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述孵育条件为：孵育温度为65℃，孵育时间为3-5min；孵育期间涡旋3-5次，每次涡旋10s。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2)具体为：向步骤1)获得的孵育混合液中加入氯仿-异戊醇混合溶液然后进行涡旋混合，再进行离心处理，室温下10000r/min，离心15min，取上清液，即得抽提上清液。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述乙醇溶液为体积浓度70％乙醇溶液，使用RNase-free的DEPC处理水的超纯水配置。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤5)中，所述SSTE缓冲液组成：0.5％SDS十二烷基硫酸钠、1.0mol/L NaCl、10mmol/L Tris-HCl(pH＝8.0)和1mmol/LEDTA-Na₂(pH＝8.0)。

7.根据权利要求1或6所述的提取方法，其特征在于，步骤5)中SSTE缓冲液与氯仿-异戊醇混合溶液的体积比为1:1。

8.根据权利要求1或6所述的提取方法，其特征在于，步骤6)中，所述离心上清液与无水乙醇的体积比为1:2。

9.根据权利要求1或6所述的提取方法，其特征在于，步骤6)中，所述静置，条件为：-70℃条件下静置时间为30min，或，-20℃条件下静置时间为2h。

10.根据权利要求1或6所述的提取方法，其特征在于，步骤7)具体为：将步骤6)获得的沉淀物用乙醇溶液，4℃条件下10000r/min，离心5min，得到沉淀物，所得沉淀物再加入无水乙醇，4℃条件下10000r/min，离心5min，得到沉淀物。