[发明专利]一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法

说明书

一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，属于植物油脂的转基因成分检测技术领域。所述方法步骤如下：向Eppendorf管加入250μL正己烷和250μL DNA裂解液，再加入500μL转基因食用油脂，混合后裂解；加入0.5mL预冷的三氯甲烷和异戊醇的混合液，混合后，冷冻离心，上清液收集到一个Eppendorf管中；重复上述步骤；向装有上清液的Eppendorf管中加预冷的异丙醇，放置沉淀；沉淀后冷冻离心，弃去上清液，再加入乙醇进行洗涤，冷冻离心，弃去上清液，沉淀物烘干，每10min观察一次直至完全晾干；加入TE缓冲液，充分溶解DNA，保存备用。本发明解决了植物油中DNA模板难提取的问题，此操作方法简便，快捷，灵敏度高，可适用于大部分植物油中DNA的提取，提取时间短，且纯度较高。

技术领域

本发明属于植物油脂的转基因成分检测技术领域，具体涉及一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法。

背景技术

目前，食用植物油一般是经过原材料压榨，获得初级毛油，毛油经过滤、脱胶、脱酸、脱色、脱臭等加工环节精炼而成，在加工环节需要经过240℃高温、高压、蒸汽、强碱等处理，DNA严重降解且破坏成小分子。由于食用植物油经各种工艺加工后，蛋白质分子变性且被分离，其转基因成分主要集中在DNA水平的检测。利用PCR方法检测加工食品中的转基因成分，主要依赖于分离DNA质量、纯度和总量。因此，能否从食用植物油中分离符合质量的DNA，是成功检测转基因成分的关键技术环节。

国内外关于植物油DNA提取的报道，大多数采用试剂盒法提取，但是因为精炼植物油中DNA含量少且完整度低，所以目前采用的试剂盒法提取精炼油的效果并不理想，还有报道用传统的EDTA法提取，也是存在提取时间长，步骤复杂，而且得到的DNA纯度不够，即使用实时荧光定量PCR法也无法扩增出相应的內源基因。

发明内容

本发明的目的是为了解决植物油DNA提取存在的纯度低、时间长等问题，提供一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种深加工植物油脂中转基因成分提取方法，所述方法步骤如下：

步骤一：准备一支2mL Eppendorf管，加入250μL正己烷和250μL DNA裂解液，再加入500μL转基因食用油脂，充分混合后放入水浴锅中裂解1h；

步骤二：裂解后向Eppendorf管中加入0.5mL预冷的三氯甲烷和异戊醇的混合液，充分混合后，冷冻离心，将上清液收集到一个新的2mL Eppendorf管中；

步骤三：重复步骤二一次后执行步骤四；

步骤四：向装有上清液的2mL Eppendorf管中加预冷的异丙醇，放置沉淀；

步骤五：沉淀后冷冻离心，弃去上清液，再加入乙醇进行洗涤，冷冻离心，弃去上清液，沉淀物在35℃烘箱中加热1h，如未完全晾干，继续复烘，每10min观察一次直至完全晾干；

步骤六：晾干后向Eppendorf管中加入TE缓冲液，充分溶解DNA，保存备用。

本发明相对于现有技术的有益效果为：本发明解决了植物油中DNA模板难提取的问题，此操作方法简便，快捷，灵敏度高，可适用于大部分植物油中DNA的提取，提取时间短，且纯度较高。

具体实施方式

下面对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修正或等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神范围，均应涵盖在本发明的保护范围之中。