[发明专利]一种双重荧光定量PCR支原体检测试剂盒在审
| 申请号： | 201911018480.3 | 申请日： | 2019-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN110643727A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 霍欣洋;肖君华;赵阿贵;周宇荀;李凯;王斌 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 31233 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 混合体系 支原体 探针 参考基因 试剂盒 引物 双重荧光定量PCR 大肠杆菌基因组 支原体检测 标准质粒 定量PCR 超纯水 检测盒 可检测 灵敏度 检测 | ||
1.一种双重荧光定量PCR支原体检测用引物和探针组合，其特征在于，包括支原体引物及探针和参考基因引物及探针；
所述支原体引物及探针为：
Mycoplasma-F：TTAAACCACATGCTCCA，
Mycoplasma-R：ATCCGCCTGAGTAGTAT，
Mycoplasma-TaqMan：FAM-CCCGTCAATTCCTTTAAGTTTCACTC-BHQ1；
所述参考基因引物及探针为：
TOP3A-F：AGCGACTGTACGAGTTTATT，
TOP3A-R：GAGCGATGTCGATCTCC，
TOP3A-TaqMan：HEX-ATTTCCTGGCTTGCTGCT-BHQ1。
2.一种双重荧光定量PCR支原体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括PCR混合体系，支原体标准质粒和超纯水，所述PCR混合体系包括权利要求1中引物和探针组合。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述PCR混合体系还包括：探针定量PCR混合体系和参考基因标准大肠杆菌基因组。
4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述参考基因标准大肠杆菌基因组是通过PGRG36转座质粒将参考基因转座到大肠杆菌基因组上构建得到。
5.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述支原体标准质粒是通过细胞阳性支原体污染PCR产物克隆到载体PMD18-T Vector上构建得到。
6.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的荧光定量PCR扩增程序为：94℃变性4min后进入循环。
7.根据权利要求7所述试剂盒，其特征在于，所述循环的反应条件为：94℃15s，55℃30s，72℃30s，在55℃采集荧光，进行40个循环。
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