[发明专利]一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法

权利要求书

1.一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)获取无菌材料：

在冬季时剪取铁线莲半木质化的枝条，剪取的枝条为带芽的茎段，对其进行消毒杀菌处理；

(2)铁线莲的初代培养：

将消毒杀菌后的枝条切成1～2cm的茎段，每段茎段上至少带一枚健康饱满芽，将茎段接种于初代培养基上，经初代培养7天后枝条上的芽开始萌芽，然后将其移入愈伤组织诱导培养基中进行继代增殖培养，

初代培养基的成分为：1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+1.5％蔗糖+0.7％琼脂，诱导培养基的pH值为5.8～6.2；

诱导培养基的成分为：1/2MS+2mg.L^-16-BA+0.5mg.L^-1KT+0.1mg.L^-1NAA+2％蔗糖+2％香蕉+0.7％琼脂+2％香蕉+0.1mg/LVc；

(3)愈伤组织培养：

继代增殖培养20～25d后60％以上植株得到胚性愈伤组织，在愈伤组织诱导出丛生芽后，将丛生芽切分成单株或小的茎段，重新接种于新更换的pH为5.8-6.2愈伤组织诱导培养基中，再持续培养20～25d，愈伤组织持续分化出丛生芽，继续培养20～25天诱导出现不定根。

2.根据权利要求1所述的铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法，其特征在于：步骤(1)中，消毒杀菌处理具体为：将剪取的半木质化茎段先用0.1％洗衣粉浸泡8～10min，再用自来水冲洗60min；冲洗后先用0.1-0.2％百菌清浸泡5～10min，浸泡后用无菌水冲洗3次，接着用多菌灵浸泡5～10min，再用流水冲洗3次，最后将其置于超净工作台上，用质量分数75％的乙醇浸泡30～60s，浸泡完用无菌水冲洗3次，再用加入1滴吐温80的质量分数为0.1％的升汞溶液浸泡6～8min，最后再用无菌水冲洗3次后接种。

3.根据权利要求1所述的种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法，其特征在于：步骤(2)中，继代增殖培养的温度为24～26℃，光照强度为3000～4000Lux。

4.根据权利要求1所述的种铁线莲愈伤组织的诱导方法，其特征在于：步骤(3)中，将丛生芽切分成单株或小的茎段，单株茎段或小的茎段的长度为2.0～3.5cm。