[发明专利]用于PCOS诊断的颗粒细胞生物标志物及其筛选方法和诊断试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于PCOS诊断的颗粒细胞生物标志物及其筛选方法和诊断试剂盒，采用RNA‑seq、miRNA‑seq与MBD‑seq技术联合分析的方法，在全基因组范围内筛选PCOS相关生物标志物，并发现了新的诊断标志物。标志物包括miR‑429，miR‑141‑3p，和miR‑126‑3p；和/或，XIAP基因，BRD3基因，MAPK14基因和SLC7A5基因。与现有技术相比，本发明具有检测灵敏性和精确度高等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种用于PCOS诊断的颗粒细胞生物标志物及其筛选方法和诊断试剂盒。

背景技术

多囊卵巢综合症(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种育龄妇女常见的内分泌、代谢紊乱疾病。该疾病最常见的临床表现是女性出现高雄激素血症，导致月经紊乱、稀少、闭经或不规则阴道出血、不孕、肥胖、多毛、子宫内膜过度增生及恶性变化、以及双侧或单侧卵巢呈多囊性改变并多伴有肥胖表型；在糖脂内分泌代谢方面出现胰岛素抵抗，继而引发糖尿病等并发症，远期并发症还包括心血管疾病和子宫内膜癌等。根据鹿特丹ESHRE/ASRM(2003)标准，我国PCOS患病率在5.6％左右。PCOS的临床表现存在异质性，在基础研究方面该病的相关机制研究一直是热点和难点。目前普遍认为PCOS是由环境因素及遗传因素等共同导致的一种涉及多的组织、器官、系统代谢综合征。

目前的研究表明，年龄、环境/生活方式、疾病状态等多种因素的影响可以通过表观遗传修饰改变多囊卵巢综合征的临床表现。DNA甲基化和microRNAs(miRNAs)是基因表达调控中两种主要的表观遗传修饰。miRNAs是一种转录后负调控基因表达的非编码小RNA，通过调控靶基因的转录表达广泛参与机体生长、发育和疾病发生等各种生命过程。同时，异常的DNA甲基化表现在全局基因组的稳定性保存和局部基因启动子的改变上，影响致病基因的转录水平。研究表明，与正常人相比，PCOS患者的卵泡、卵巢颗粒细胞及脂肪组织等中存在明显的全基因组DNA甲基化和miRNA表达的模式变化。

虽然在PCOS中miRNA和DNA甲基化的表观遗传调控作用都分别得到了广泛的研究，但miRNA与DNA甲基化的相互作用机制仍未被发现。DNA甲基化通过超/低甲基化miRNA启动子区域来调控miRNA的转录。同时，miRNA可以通过直接靶向DNA甲基转移酶和甲基化相关的关键蛋白来调控全基因组的DNA甲基化模式。

目前关于PCOS的分子诊断标志物有代谢产物、卵泡数目、SNP标记等。公告号为CN104411824B的已授权专利公开了一种由至少15个SNP标记组成的，用于预测PCOS风险的探针组。公告号为CN106442764A的已授权专利公开了一组由环磷酸鸟苷、硫酸脱氢表雄酮、棕榈鞘磷脂联合高密度脂蛋白胆固醇和左卵泡数目组成的联合标志物，作为PCOS的诊断、分型标志物的制备和应用。

但是上述两件专利公开的技术存在以下主要缺点：传统的多囊卵巢综合征诊断主要依靠临床表现、雄激素水平检测和卵巢B超检测。根据鹿特丹ESHRE/ASRM(2003)标准，须满足下述三项中的两项：月经稀发；临床或者生化雄激素过多症；双侧或单侧卵巢多囊样改变和/或体积增大。但上述技术不易检测到症状不明显的多囊卵巢综合征患者，灵敏度和精准性较低。随着生物技术的发展，生物标志物为PCOS的诊断提供了一种新的途径。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种灵敏度和精准性高的用于PCOS诊断的颗粒细胞生物标志物及其筛选方法和诊断试剂盒。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供了一种用于PCOS诊断的颗粒细胞生物标志物，其特征在于，包括miR-429，miR-141-3p，和miR-126-3p；和/或，XIAP基因，BRD3基因，MAPK14基因和SLC7A5基因。