[发明专利]一种直接识别异丙威的单链抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种直接识别异丙威的单链抗体及其制备方法和应用，该单链抗体氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；其编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。利用该单链抗体异丙威的ELiSA检测方法，可实现大量样品的快速检测筛选，降低成本；该单链抗体能通过基因工程技术体外表达，可在细菌中大规模经济化生产，避免单克隆细胞的丢失风险；该单链抗体与抗原的结合可被游离的半抗原异丙威竞争性抑制，具有很好的抗原结合活性。该基因工程抗体在异丙威的免疫检测和大量样品的快速检测筛选方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品安全检测技术领域，更具体地，涉及一种直接识别异丙威的单链抗体(scFv)及其制备方法和应用。

背景技术

异丙威(Isoprocarb，IPC)，又名灭扑散，叶蝉散，化学名称：2-异丙基苯基-N-甲基氨基甲酸酯，属于触杀性氨基甲酸酯类的一种常见杀虫剂，通过抑制昆虫体内的乙酰胆碱酯酶的生物活性，从而将昆虫麻痹致死，此类杀虫剂进入人体内也可抑制乙酰胆碱酯酶，造成急性中毒，刺激中枢神经系统，对人类健康存在潜在的危险，因此许多国家和地区对这种农药在水果蔬菜中的残留量都制定了严格的限量标准，中国农业部规定，叶菜类蔬菜中异丙威的最大残留限量为0.1μg/mL，水稻中允许的最大残留限量为0.2mg/kg，为确保食品安全，国际组织已确定氨基甲酸酯类杀虫剂在作物中的最大残留量Maximum Residue Limits(MR Ls)为0.02～5mg/kg。

近十几年来，食品中农药残留物在世界范围内引起了人们的关注，然而对异丙威残留物的研究不多。目前在很多国家，尤其是发展中国家中，大量不科学地使用也导致人畜中毒现象时有发生,因为这类农药也具有较强生物毒性。因此对农产品中异丙威残留建立检测方法十分必要。

前国内外的分析报道中，异丙威的常用检测方法主要包括仪器分析方法和免疫学分析方法。前者包括高效液相色谱检测法(HPLC)，气相色谱检测法(GC)高效液相色谱-质谱联用检测法(HPLC-MS)和气相色谱-质谱联用检测法(GC-MS)等仪器检测法，后者主要包括酶联免疫分析法(ELISA)和胶体金免疫层析法(ICA)。仪器检测方法都存在仪器设备昂贵并且要求专业的操作人员，前处理复杂，检验周期长和检测成本高等缺陷，无法满足现行对农产品中农药残留快速，准确的检测需求。而免疫学分析方法具有灵敏度高，特异性强，前处理简单，可实现现场高通量筛查和检验周期短等优点。在农药检测领域占有重要地位。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有异丙威检测技术的缺陷和不足，提供一种可直接识别异丙威的单链抗体(Single-chain antibody)。

本发明的第一个目的是提供一种直接识别异丙威的单链抗体。

本发明的第二个目的是提供一种直接识别异丙威的单链抗体的编码基因。

本发明的第三个目的是提供一种重组载体。

本发明的第四个目的是提供一种重组细胞。

本发明的第五个目的是提供所述单链抗体、所述编码基因、所述重组载体、所述重组细胞任意的一种或几种在检测异丙威或制备检测异丙威试剂盒中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种异丙威的酶联免疫检测方法。

本发明的第七个目的是提供一种识别异丙威的单链抗体的制备方法。

本发明的第八个目的是提供一种检测异丙威的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明要求保护以下内容：

一种直接识别异丙威的单链抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

一种直接识别异丙威的单链抗体的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。