[发明专利]转基因大豆GTS-40-3-2品系EFIRM检测探针及其应用

说明书

本发明公开转基因大豆GTS‑40‑3‑2品系EFIRM检测探针及其应用。所述检测探针包括SEQ ID NO.1‑4的核苷酸序列。本发明针对转基因大豆GTS‑40‑3‑2品系特异性基因，自主设计了EFIRM法检测转基因大豆GTS‑40‑3‑2品系的特异性捕获探针和杂交探针，采用EFIRM技术对食品及饲料中转基因大豆GTS‑40‑3‑2品系成分进行定性检测。本发明对提高食品和饲料中转基因大豆GTS‑40‑3‑2品系的检测效率及灵敏度，降低检测成本，检测进出口和国内市场上相关转基因产品，进行食品安全转基因监测和提高转基因检测技术具有重要意义，具有广阔发展前景。

技术领域

本发明属于食品和农产品转基因安全检测和监测领域，具体涉及一种食品和饲料中转基因大豆GTS-40-3-2品系应用EFIRM法特异性检测探针，以及相关的试剂盒、 检测方法、其方法建立等。

背景技术

电场诱导的释放与检测技术(Electric Field-induced Release andMeasurement， EFIRM)是一项革新的技术，创造性地采用超高活性分子探针固定、电场瞬间捕获靶 标分子、捕获分子信号特异放大三大核心专利技术，从而实现无需PCR扩增，直接检测痕量靶标分子。与传统的PCR技术相比，兼具精准可靠、快速便捷、经济的明显优 势。EFIRM技术主要用于液体活检无创基因精准检测、肿瘤早期诊断，外泌体生物标 志物和多重生物标志物的检测。目前，EFIRM技术在食品安全、转基因检测领域的应 用仍为空白。本发明创新性将EFIRM技术应用于转基因大豆检测，自主设计转基因大 豆GTS-40-3-2品系EFIRM特异性检测捕获探针和杂交探针，建立转基因大豆 GTS-40-3-2品系EFIRM特异性检测方法，研制转基因大豆GTS-40-3-2品系EFIRM特异 性检测试剂盒。

转基因大豆GTS-40-3-2品系是美国孟山都公司研发的抗草胺磷除草剂的转基因大豆品种，1994年已获美国官方批准用于生产种植、食用和饲用，并相继在欧盟、加 拿大、巴西、阿根廷、澳大利亚、日本、韩国、墨西哥、南非等国获准进行商业化种 植或作为食品原料进口。经对相关检测结果报告进行严格审查后，该品系已于2004 年被我国批准许可进口及使用。

目前，国内对转基因大豆GTS-40-3-2及其衍生品种的检测方法主要有实时荧光PCR方法、基因芯片方法、LAMP检测方法、普通PCR方法和PCR-DHPLC检测方法。 这些方法各有优缺点，由于以上方法均需要通过PCR反应来扩增目标基因片段的数 量，因此都无法避免基因扩增造成的气溶胶污染，对实验环境以及实验人员的要求很 高，标准实验室造价高昂，整体运行成本高，也无法进行现场检测，影响进出口转基 因大豆快速通关。

转基因产品检测方法是转基因产品安全监管实施的核心技术依据，更快速高效、更准确灵敏和低成本的转基因检测技术能为转基因产品安全监管提供更有力的技术支撑。电场诱导的释放与检测技术(EFIRM)是一项革新的技术，采用EFIRM技术不存 在基因扩展造成的污染问题，无需建立扩增实验室，使得检测操作更简便易行。如果 针对具体的检测物建立准确灵敏、高效便捷的检测过程是该技术得以深入利用的关键。

发明内容

本发明将EFIRM检测技术应用于转基因大豆GTS-40-3-2品系检测，利用EFIRM检测技术可以探测两种电流信号，针对大豆GTS-40-3-2品系特异性序列和大豆内源 Lectin基因设计合适的探针，旨在通过一次实验同时测得品系特异序列和内源基因的电 流信号。藉此为我国进出口贸易提供更加准确、可信的转基因成分检测数据，满足欧 盟及其他国家标识要求，打破国外对我国出口产品所设置的转基因技术壁垒，并为相 关部门对转基因大豆及其制品的监控、安全评价和风险预警等提供技术支持。

基于以上目的，本发明首先针对转基因大豆GTS-40-3-2品系特异性基因片段，设计并筛选出灵敏度及特异性最高的捕获探针和杂交探针。本发明的转基因大豆 GTS-40-3-2品系EFIRM检测探针，包括GTS-40-3-2检测探针和Lectin检测探针，其中：