[发明专利]一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法

说明书

本发明涉及一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法，包括以下步骤：步骤S1：将工蜂头部两侧完整的一对咽下腺，放入PBS缓冲溶液中清洗1~2次；步骤S2：取步骤S1中处理后的咽下腺放入载玻片上，移液器滴入1~2滴考马斯亮蓝染液覆盖咽下腺，染色时间1~2分钟；步骤S3：将步骤S2中染色后的样品放入PBS缓冲液中清洗1~2分钟；步骤S4：将步骤S3中的样品放在干净的载破片上用手术剪刀将咽下腺剪成均匀小段，滴一滴PBS缓冲液充分覆盖样品；步骤S5：获取包括蜜蜂咽下腺单个腺泡的图像；步骤S6：采用像素法计算腺泡面积，用以评估咽下腺分泌蜂王浆的活性。本发明使不具备高精尖设备的普通实验室即可完成腺泡面积的测定，节约成本。

技术领域

本发明涉及蜜蜂科学领域，特别是一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法。

背景技术

蜜蜂具有明显的级型分化和复杂的社会分工，是适合研究社会进化的模式生物。蜂群成员间的劳动分工具有极强的可塑性。蜂群的劳动分工分化出的哺育蜂和采集蜂不仅在群体繁衍发展方面发挥重要作用，更为人类带来巨大的经济效益。由哺育蜂分泌出的蜂王浆不仅对蜂群的发展至关重要，对于协调人体内各项机能的健康发展也起到了不可或缺的作用。蜂王浆的生理生化、药理疗效功能已在国内外得到广泛的研究，蜂王浆产业也极大促进了蜂业经济的发展。

蜂王浆主要由青年工蜂(哺育蜂)咽下腺和上颚腺分泌，其中咽下腺是分泌蜂王浆的重要器官。咽下腺呈葡萄串状缠绕在工蜂头部两侧，其生理功能及外观形态会随着工蜂在蜂群内职务的改变而发生变化。一般情况下，6-12日龄的青年哺育蜂在巢房内从事哺育等工作，其咽下腺腺泡直径达到最大；15日龄之后老年采集蜂转到巢外采集花粉、花蜜等工作，其腺泡开始逐渐萎缩。咽下腺的形态和大小与其分泌活性呈正相关。然而，工蜂的劳动分工也会随着外界环境的改变而发生变化，包括加速、延缓，甚至逆转。老年采集蜂在缺乏哺育蜂的蜂群中也会变成老年哺育蜂，青年哺育蜂在缺乏采集蜂的蜂群中也会变成幼年采集蜂，因此，利用日龄来判断哺育蜂和采集蜂，进而确定咽下腺的分泌活性高低就不是特别准确。利用咽下腺的大小来判断其分泌活性是一种直接、可靠的方法。

目前，咽下腺腺泡大小的测定有三种方法：通过扫描电镜拍摄腺泡形态，并计算腺泡直径大小；采用吉姆萨染色，并运用莱卡公司专业配套软件计算腺泡面积大小；使用扫描电镜扫描法计算单个腺泡的直径大小更适用于哺育蜂饱满圆润的腺泡大小测定，而对于采集蜂的咽下腺形态已处于严重萎缩状态，用直径表示腺泡大小并不准确，且扫描电镜价格昂贵，一般的实验室难以购买。基于上述原因，克服和解决上述方法中的局限性，开发一种简单、有效的测量咽下腺单个腺泡面积的方法显得尤为必要。简单、快速的单个腺泡面积测量方法也将为快速筛选蜂王浆分泌活性高的蜂种提供基础技术支持。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法，成本低，操作简单，结果可靠。

本发明采用以下方案实现：一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法，包括以下步骤：

步骤S1：将工蜂头部两侧完整的一对咽下腺，放入PBS缓冲溶液中清洗1～2次；

步骤S2：取步骤S1中处理后的咽下腺放入载玻片上，移液器滴入1～2滴考马斯亮蓝染液覆盖咽下腺，染色时间1～2分钟；

步骤S3：将步骤S2中染色后的样品放入PBS缓冲液中清洗1～2分钟；

步骤S4：将步骤S3中的样品放在干净的载破片上用手术剪刀将咽下腺剪成均匀小段，滴一滴PBS缓冲液充分覆盖样品；

步骤S5：获取包括蜜蜂咽下腺单个腺泡的图像；

步骤S6：采用像素法计算腺泡面积。

进一步地，所述PBS缓冲液采用的是0.01mol/L的磷酸盐缓冲液。

进一步地，步骤S2中所述考马斯亮蓝染液采用的是考马斯亮蓝R250染色液。